请高手帮我看看小鼠MSC,有问题求助

生物化学zy

$ T/ S- b3 O) x$ [, M7 T1 a* B- }3 r3 Y5 k9 a, X& f3 R/ j  t* j
请各位高手帮帮忙.我用ICR小鼠进行MSC培养,使用全骨髓铺板法,一个小鼠的两个后腿,铺板于6孔板的2个孔.3天后进行全量换液.使用的培养基为
3 M- V3 r9 j4 b" u/ w" za-mem(hyclone)+10%FBS(PAA)+1%p/s(PAA)+1%NEA(PAA)+1%Glu(Gibco)
  _' L4 m# V7 |- \1 h6 W在第3天全量换液后细胞的状态如下,出现较多的贴壁的纤维状细胞,但是纤维状细胞上还有一层点状的细胞,也是贴壁的.应该是杂细胞! P# Q$ X! j! v
想问一下高手
* X  O: T! x; B* U1.这些点状的杂细胞,如何去除?是经过细胞不断传代与换液就可以吗?
3 D9 u* A* W# G. K. ~) t! g2.我分的小鼠的MSC第3天的细胞的状态如何?能否长起来. f, I9 z) K# _+ G) N! N1 A0 \8 l
3.若进行原代到p1的传代的话,细胞要生长到何种状态就可以进行,是需要进行1:1传吗?也就是消化下来重新进行铺板.1 H& M3 s  f0 p2 l- v: D5 \
请求高手给看看5 @! E" P/ p0 e

4 O+ K+ a; t& R" V: s6 x: @) @# q/ t0 u4 b# q  H, l" M
% ^# G0 l3 a- M( g

/ p0 a+ s2 h) _: }9 Z  _) ?

生物化学zy

4,3 是10倍镜下
! c. i( ]3 r. f0 Z5 R+ U1 K- ~# d2,1是4倍镜下

wnavy200299

讨论讨论，最近也在摸索这玩意儿，闹心ing~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
9 E5 \" `/ p3 U% I7 ?

1301918986

照片不是很清楚，杂细胞的话，在传代过程中就会去除。这是原代吧，如果克隆中心的细胞比较密集的话就可以1:1传代了。

生物化学zy

回复 1301918986 的帖子
8 |. W8 F7 {1 {3 ?7 g: F* r8 ]5 _# T4 J& n" \' a) y
是原代的细胞.第3天的,刚开始时铺板3天,没有换液,在3天时全量换液,就会这样.3 ?) }  u5 S6 R* K
你们第一次传代时第几天?

bb6120

换液时要用PBS或者培养基洗几遍。之后再换上新液。干细胞传代跟其他的一样，都是张到90%左右就可以传了

大少爷

不会是破骨细胞吧。纯化：待细胞融合达8 0 ％ ～9 0 ％ ， 用胰酶消化，按1 ：3传代，利用破骨样细胞与M S C对胰酶敏感性的不同， 可 以粗略分离2 种细胞 。梭形细胞先脱壁， 呈圆形， 破骨样细胞贴壁牢固， 不易被消化集脱壁。倒置显微镜和 电子显微镜下观察细胞形态。细胞种植后， 1 2 h 内完全贴壁， 变为梭形。传代后大部分细胞和其他杂细胞(包括破骨样细胞)逐渐被去除。至第3代剩下形态较为单一的成纤维样细胞， 呈漩涡状、 辐射状列， 即为间充质干细胞 。

生物化学zy

回复 大少爷 的帖子
8 ?/ S7 C/ G/ ]: G- y
& x2 e5 p5 {' W# f2 P胰酶消化时的时间是多久即可?消化下来的细胞是MSC.未消化下来的细胞是杂细胞.室温?还是37度消化?

生物化学zy

回复 bb6120 的帖子
) x3 h8 e9 J2 n
' b2 o7 ^% l2 M* S6 N但是说MSC长的太慢会不会导致其分化.有没有这说法?

1301918986

回复 生物化学zy 的帖子
! T! m5 V2 X3 e2 X/ z# Z1 @! T/ {2 k% j' L( R
我们在差不多72h就全量换液了，但是换液是不要摇晃，四五天第一次传代。