请高手帮我看看小鼠MSC,有问题求助

生物化学zy

5 ?/ k, N" [$ N: I9 X8 r4 y9 e
3 Z  P$ |( ~& m( @: N6 W请各位高手帮帮忙.我用ICR小鼠进行MSC培养,使用全骨髓铺板法,一个小鼠的两个后腿,铺板于6孔板的2个孔.3天后进行全量换液.使用的培养基为5 O) v/ p- _" j7 }+ S
a-mem(hyclone)+10%FBS(PAA)+1%p/s(PAA)+1%NEA(PAA)+1%Glu(Gibco)9 r7 [2 M4 f' J* O4 P2 Z4 W8 \
在第3天全量换液后细胞的状态如下,出现较多的贴壁的纤维状细胞,但是纤维状细胞上还有一层点状的细胞,也是贴壁的.应该是杂细胞
( Q2 L% Q8 p& ~- N% \. E  {想问一下高手
1 }+ s! ?  f% V1 [) C' [- S1.这些点状的杂细胞,如何去除?是经过细胞不断传代与换液就可以吗?' @7 u4 j+ B$ W* v' H
2.我分的小鼠的MSC第3天的细胞的状态如何?能否长起来
( w6 x( Q" @1 L' Q4 t) X: j9 [3.若进行原代到p1的传代的话,细胞要生长到何种状态就可以进行,是需要进行1:1传吗?也就是消化下来重新进行铺板.7 P+ z- W; f2 C6 Q! i" @: q
请求高手给看看4 O9 d, b8 U2 C% B

" ?4 E3 i2 j4 B0 i7 z/ v# p/ f
- ^+ K/ V' F7 A! N1 n5 G' |0 w- w7 @# ~- v

- z/ M( o4 \+ h+ ]5 M+ K- r

ndwzf

看你这细胞的状态应能涨起来。
$ ?9 L1 p) p. X: U2 N6 t; d/ n我们一般三天换液。" Y$ b# H9 V* I4 ^7 O0 ~
你这个密度一传二较合适，不用1：1传。

bb6120

回复 生物化学zy 的帖子9 ~) d% B  c5 z3 L& g

0 r6 N$ q8 D: e; Y6 r& i8 `这个就不是很清楚了，MSC细胞分化跟培养基成分也是有关的！原代的MSC一般都是长的比较慢！经过传代之后就快很多！

Learner

感觉细胞形态不太好，不像梭形的成纤维细胞。可能是杂细胞较多。# v# @3 g! d8 o7 e

gact

你的protocol是参照哪个paper？

759512199

回复 生物化学zy 的帖子
" X: D) N* r3 r" \, t+ h
! ]) \+ C, J# p" P冻存再复苏细胞死掉一下很正常，冻存液和低温本身就对细胞有一定的伤害。操作好的话活细胞率可达95%以上。你也没有必要深究多大板子冻一管，一管冻多少无所谓，关键是你复苏时需要多少细胞。你可以冻存之前把细胞记一下数，然后一个冻存管就冻一定量的细胞，需要时用多少就复苏多少。

生物化学zy

回复 1301918986 的帖子
  {+ w* P% u) A' Z) `7 }  ?- [
) S% S% M+ }6 L0 _; q( \MSC在细胞6孔板中,1孔冻存一管后,复苏6孔板的1个孔,密度会小吗?还是说,冻存的时候细胞就少?如果是这样的话,建议多大板子冻1管?
7 Z$ N9 M% [( r. I- o, ?" j+ \

生物化学zy

回复 tingwuyu 的帖子4 {0 e' S& k% l& F' `6 @' ]
) k0 @5 o' a! \5 Y0 S/ p5 \
MSC在细胞6孔板中,1孔冻存一管后,复苏6孔板的1个孔,密度会小吗?还是说,冻存的时候细胞就少?如果是这样的话,建议多大板子冻1管?
# n: V7 R1 P% z( P. P, d

生物化学zy

回复 759512199 的帖子
9 O: x7 ?7 D( Z1 d2 P) U( @3 W8 i/ Z( L5 Z: z
MSC在细胞6孔板中,1孔冻存一管后,复苏6孔板的1个孔,密度会小吗?还是说,冻存的时候细胞就少?如果是这样的话,建议多大板子冻1管?

生物化学zy

回复 759512199 的帖子' O, d2 R, u5 N2 S
& K# o" u0 B& ~1 @
谢谢,了解了