请高手帮我看看小鼠MSC,有问题求助

生物化学zy

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2 y0 g( H$ O$ J) p请各位高手帮帮忙.我用ICR小鼠进行MSC培养,使用全骨髓铺板法,一个小鼠的两个后腿,铺板于6孔板的2个孔.3天后进行全量换液.使用的培养基为! U9 p; ]9 h" P8 d8 S
a-mem(hyclone)+10%FBS(PAA)+1%p/s(PAA)+1%NEA(PAA)+1%Glu(Gibco)
+ F/ o) F% j6 `4 J6 ?在第3天全量换液后细胞的状态如下,出现较多的贴壁的纤维状细胞,但是纤维状细胞上还有一层点状的细胞,也是贴壁的.应该是杂细胞' A6 p# k/ H; r% `  i9 H
想问一下高手4 U$ _/ ^; o& ]
1.这些点状的杂细胞,如何去除?是经过细胞不断传代与换液就可以吗?
( {. ]) w  B, N! x1 ^+ ?. p& [4 E2.我分的小鼠的MSC第3天的细胞的状态如何?能否长起来
% s/ A% P2 i* M% q3.若进行原代到p1的传代的话,细胞要生长到何种状态就可以进行,是需要进行1:1传吗?也就是消化下来重新进行铺板.+ U" ^) H% n7 h% A
请求高手给看看
2 L% V2 k- [& y& }7 E9 h7 K/ s; f& u3 G9 p$ v5 I7 H$ s) }

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  k3 x/ [; z0 C# b$ U/ O2 ~! `) J% l( k

生物化学zy

4,3 是10倍镜下4 |* F2 m& {; O4 ~- p( g) Y
2,1是4倍镜下

wnavy200299

讨论讨论，最近也在摸索这玩意儿，闹心ing~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~, Y7 |# B% ^& o7 Z" n# g( }

1301918986

照片不是很清楚，杂细胞的话，在传代过程中就会去除。这是原代吧，如果克隆中心的细胞比较密集的话就可以1:1传代了。

生物化学zy

回复 1301918986 的帖子. {8 T# {9 O* F; L1 \) ?
2 f& ~+ L9 K% L0 }, e# ~) `
是原代的细胞.第3天的,刚开始时铺板3天,没有换液,在3天时全量换液,就会这样.4 N  T1 Y' n) Y$ l: u& ?. Y9 H
你们第一次传代时第几天?

bb6120

换液时要用PBS或者培养基洗几遍。之后再换上新液。干细胞传代跟其他的一样，都是张到90%左右就可以传了

大少爷

不会是破骨细胞吧。纯化：待细胞融合达8 0 ％ ～9 0 ％ ， 用胰酶消化，按1 ：3传代，利用破骨样细胞与M S C对胰酶敏感性的不同， 可 以粗略分离2 种细胞 。梭形细胞先脱壁， 呈圆形， 破骨样细胞贴壁牢固， 不易被消化集脱壁。倒置显微镜和 电子显微镜下观察细胞形态。细胞种植后， 1 2 h 内完全贴壁， 变为梭形。传代后大部分细胞和其他杂细胞(包括破骨样细胞)逐渐被去除。至第3代剩下形态较为单一的成纤维样细胞， 呈漩涡状、 辐射状列， 即为间充质干细胞 。

生物化学zy

回复 大少爷 的帖子2 H* L/ d% K0 m- n7 `( U. z# k0 d

  v# J! [# q8 O/ N胰酶消化时的时间是多久即可?消化下来的细胞是MSC.未消化下来的细胞是杂细胞.室温?还是37度消化?

生物化学zy

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, K0 u# W1 P3 b& r8 b, N! {1 I* t2 F; A# d
但是说MSC长的太慢会不会导致其分化.有没有这说法?

1301918986

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0 L) F# M1 s: I. V! y' q1 ^: d& n' z2 j4 I- E$ q
我们在差不多72h就全量换液了，但是换液是不要摇晃，四五天第一次传代。