请高手帮我看看小鼠MSC,有问题求助

生物化学zy

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  Y( M- I, O/ O% _请各位高手帮帮忙.我用ICR小鼠进行MSC培养,使用全骨髓铺板法,一个小鼠的两个后腿,铺板于6孔板的2个孔.3天后进行全量换液.使用的培养基为
3 C# k/ X  G* u& G' Ia-mem(hyclone)+10%FBS(PAA)+1%p/s(PAA)+1%NEA(PAA)+1%Glu(Gibco)
+ f$ G) [) `, i! k: A. I" R( F" ]在第3天全量换液后细胞的状态如下,出现较多的贴壁的纤维状细胞,但是纤维状细胞上还有一层点状的细胞,也是贴壁的.应该是杂细胞2 {. z" q& x# M' P0 s
想问一下高手
* |- R9 |$ M0 K1 ^& @4 W: U- u$ k: X1.这些点状的杂细胞,如何去除?是经过细胞不断传代与换液就可以吗?
% V7 p  I- |! G% ?' l2.我分的小鼠的MSC第3天的细胞的状态如何?能否长起来
# v' ]6 r* w: G3.若进行原代到p1的传代的话,细胞要生长到何种状态就可以进行,是需要进行1:1传吗?也就是消化下来重新进行铺板.  i0 g- Z2 p& g% c. X+ V
请求高手给看看
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2 p/ t2 K: a* Z3 d+ ^, B- U
2 Z  A# D1 u2 a/ a3 A5 q* {0 Z* e/ U( F3 ]
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生物化学zy

4,3 是10倍镜下8 g0 U9 I5 b) d' Z* u; P2 K
2,1是4倍镜下

wnavy200299

讨论讨论，最近也在摸索这玩意儿，闹心ing~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
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1301918986

照片不是很清楚，杂细胞的话，在传代过程中就会去除。这是原代吧，如果克隆中心的细胞比较密集的话就可以1:1传代了。

生物化学zy

回复 1301918986 的帖子: ^7 e0 n) a$ B
: k3 i0 J" x( J
是原代的细胞.第3天的,刚开始时铺板3天,没有换液,在3天时全量换液,就会这样.9 q- n+ q" E6 Q0 ^
你们第一次传代时第几天?

bb6120

换液时要用PBS或者培养基洗几遍。之后再换上新液。干细胞传代跟其他的一样，都是张到90%左右就可以传了

大少爷

不会是破骨细胞吧。纯化：待细胞融合达8 0 ％ ～9 0 ％ ， 用胰酶消化，按1 ：3传代，利用破骨样细胞与M S C对胰酶敏感性的不同， 可 以粗略分离2 种细胞 。梭形细胞先脱壁， 呈圆形， 破骨样细胞贴壁牢固， 不易被消化集脱壁。倒置显微镜和 电子显微镜下观察细胞形态。细胞种植后， 1 2 h 内完全贴壁， 变为梭形。传代后大部分细胞和其他杂细胞(包括破骨样细胞)逐渐被去除。至第3代剩下形态较为单一的成纤维样细胞， 呈漩涡状、 辐射状列， 即为间充质干细胞 。

生物化学zy

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8 ]) U. s, T3 G9 u! u! z: B- e( r9 q# I7 E
胰酶消化时的时间是多久即可?消化下来的细胞是MSC.未消化下来的细胞是杂细胞.室温?还是37度消化?

生物化学zy

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; h1 x- n& E3 Y4 u/ i2 J; s
. J4 w2 |4 |( T3 Z但是说MSC长的太慢会不会导致其分化.有没有这说法?

1301918986

回复 生物化学zy 的帖子1 C0 e: B! x0 U8 i
' g( \. S) o  x" }3 }' Q
我们在差不多72h就全量换液了，但是换液是不要摇晃，四五天第一次传代。