又翻了一篇Nature Protocol （关于ips诱导的整个过程）

huangcong1988

回复 always_wp 的帖子3 d" g' R) n' a+ M9 l- l& I
) o0 N) |. G; v) z- [
分别啊，一个皿全部包4个毒，SO CRAZY!呵呵:)

always_wp

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. T6 h7 y  J# ^6 J$ m. |
+ R0 ]* o& ]# X0 v: C& F, z你好，想问问“3）加入9 微克 of pMXs plasmid DNA (encoding Oct3/4, Sox2, Klf4 and c-Myc)到Fugene 6/DMEM-containing tube（drop-by-drop），用手指轻拍混匀，孵育15min9 S  j$ T) r' Q# E1 j
”是四种质粒分别用培养皿的platE包毒，还是只用一个培养皿的platE 包装4种病毒呢+ E# A9 A2 e  v

huangcong1988

回复 midautumn 的帖子  `  h& v6 ^$ ^# @5 }: I8 N
5 @- n" O( ]4 C6 C
没事，相互帮助嘛

midautumn

回复 huangcong1988 的帖子( j8 m) k/ b  y% l& K) A

- V$ ~) y/ \) w% M7 [5 _% K太感谢啦！！

huangcong1988

回复 midautumn 的帖子3 x% I# C) c+ B, f

  ^4 D+ E* M- M7 |$ Y呵呵，其实刚开始都有很多疑问，我也是
7 k0 O: G* H4 ^3 J/ t% n首先，MEF是作为ips诱导的原材料，MEF和TTF都是
5 z+ l2 P: |5 ~( ^" K1 G然后，PLaT-E cell用来收集慢病毒的，因为构建好的慢病毒载体要包装，用慢病毒感染PLaT-E以后收集上清，用来感染MEF，诱导ips产生1 A! J" I: r8 r7 l5 Y: u1 T
最后，SNL作为饲养层，有它的特性，你可以网上查查饲养层细胞的性质，很多的，它就是在诱导ips过程中作为一种培养基质的性质

midautumn

我是新人，想要学习iPS细胞的培养。有些问题想要请教一下。/ e: M; V2 E3 C& M0 Z: N( n5 p
这里提到了三个细胞系，MEF是用于诱导iPS的吗？那Plat-E cells 转染慢病毒又是为了什么的？另外SNL细胞作饲养层细胞，是不是也能用MEF作饲养层细胞呢？% b1 E# {" d# j, w* g; A/ q, o, h, Y
新人求教，问题可能小白的点，烦请各位帮忙解答一下吧！

midautumn

我是新人，想要学习iPS细胞的培养。有些问题想要请教一下。$ R* o; a, v& E. u& L) W" h" K0 s
这里提到了三个细胞系，MEF是用于诱导iPS的吗？那Plat-E cells 转染慢病毒又是为了什么的？另外SNL细胞作饲养层细胞，是不是也能用MEF作饲养层细胞呢？4 [9 f0 W9 J4 }
新人求教，问题可能小白的点，烦请各位帮忙解答一下吧！

huangcong1988

回复 前途似锦 的帖子
; i2 i# N; Z* e6 H7 V! Z0 ?2 r+ v; `; x9 n/ H% i
呵呵，这个是07年Nature Procotol上的，直接翻的，所以可能实际操作时量可以酌情调整，呵呵，而且小鼠胚胎大小也不是固定的，酶活性也不定，所以有时候可以适当增减，是吧？

前途似锦

0.1% trypsin/0.1 mM EDTA solution (3 ml per embryo)  太多了吧  我10来个胚胎就加1-2ml  

huangcong1988

回复 sunny2829 的帖子
. u7 ]6 ~  v1 ]0 d7 m( L- j1 p
这个有点老咯，07年的，不过很经典，其实现在做方法都差不多，只是在原来的基础上改进