关于脐带干细胞培养

sunjianhua2000

我5月20日做的脐带干原代培养，大概14天左右（6月3日）镜下观察培养皿底部有7-8个致密细胞克隆团，但感觉没长到整个皿的80%，我就没有进行传代，只是换了液。第19天（6月8日）镜下观察细胞除了克隆团之外有明显增多现象，但还达不到皿的80%，此时细胞克隆团已很密，我就进行了消化传代，比例是1:2，传了2盘，传代时细胞不是很好消化。6月13日镜下观察传代细胞，细胞有增殖但细胞形态不是很好，部分细胞形态不是很规则的梭形，趋向于扁平。我想问一下传代后细胞长的有些慢，且形态不是很好的原因是什么？
. C% G7 P/ d+ u3 E1 传代时间晚？  2 没加生长因子？我用的是低糖DMEM+20%血清 没加任何生长因子 3 还是脐带间充质干细胞传代后形态就是有所改变？
2 n5 Z" |/ {! R- Y  }请有经验的大侠给予指导，万分感谢

孙帅帅

对   可能是传代较晚，原代一般7~9天后要换液重铺，然后当细胞贴壁率到80%时可以传代。

mania7041

为什么我在12天就可以传代
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azzyou

根据我的判断应该是传代过晚，局部的细胞很密其实已经有老化的趋势了，如果等到全铺满的话，细胞估计有部分已经老化了，还有就是可能传的太稀，我上次就是消化离心以后不小心吹了下，导致离心好的细胞有部分又回到上清中去了，又不管不顾的把上清弃掉了，后来接种的时候细胞量太稀了，细胞就长得又大又胖，满的时候也不紧凑，总之细胞形态比较不好。

SunYouLa

传代时间的确有些晚了 会对细胞影响' K9 A: q% G; b5 s0 h" H
组织块铺好加培养液，我们用的是α-MEM（5%FBS），3到5天补个液。
; v2 m; t& A/ K$ h8 F0 U脐带间充质肝细胞一般8到12天会爬出来，待有几个很密集的细胞团就可以倒组织块，用PBS洗两遍，加入培养液培养，3天可以传代。

帝国黑骑士

感觉好像有几点原因：
. r0 S9 G1 m4 @* Z& v4 P1.传代时间有些晚, S: Q0 k5 K8 N5 _1 K5 f7 M
2.可能是因为不好消化那所以你笑的时间比较长，影响了细胞的活性， 消化的时候建议加胰酶的时候可以加点盐水或fbs这样消化后也容易就细胞冲下来。; Q& E9 V8 r( `3 X8 ?
3.原代传的话 建议一传一 ，因为传代密度稀的话，细胞生长慢且形态不好就像你说的那样多是稀且成扁大的样子。

jss667795

血清建议用进口的好一点，传代后细胞扁平可能是老化了，细胞消化之前长得过满易老化，也可能是消化手法或者胰酶浓度问题。

田甜

传代过晚，一般14天左右就差不多传代了。传代后，培养基中血清浓度可以考虑降低或使用无血清培养基培养。不同血清对脐带间充质干细胞的影响好像还很大，会造成细胞传代后形态偏扁平且生长较慢，建议多试试不同批号的血清，找到合适的血清。

urology007

感觉好像传达有些晚，只要局部细胞长满了就该传了，等全部长满势必细胞会老化，传代后也状态不好，另外，传代的时候密度不能太低，否则长的很慢、容易老化凋亡。以上是我个人的经验。

1301918986

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# F# T3 [% i; `1 w- M% ?& ~3 {脐带原代刚开始几天我们是隔天半量换液，而且加的液体不要太多以免组织块漂浮。