关于脐带干细胞培养

sunjianhua2000

我5月20日做的脐带干原代培养，大概14天左右（6月3日）镜下观察培养皿底部有7-8个致密细胞克隆团，但感觉没长到整个皿的80%，我就没有进行传代，只是换了液。第19天（6月8日）镜下观察细胞除了克隆团之外有明显增多现象，但还达不到皿的80%，此时细胞克隆团已很密，我就进行了消化传代，比例是1:2，传了2盘，传代时细胞不是很好消化。6月13日镜下观察传代细胞，细胞有增殖但细胞形态不是很好，部分细胞形态不是很规则的梭形，趋向于扁平。我想问一下传代后细胞长的有些慢，且形态不是很好的原因是什么？
1 r1 L+ w" n) t- H2 G1 传代时间晚？  2 没加生长因子？我用的是低糖DMEM+20%血清 没加任何生长因子 3 还是脐带间充质干细胞传代后形态就是有所改变？- c( U4 ?+ s7 [% {' l! U
请有经验的大侠给予指导，万分感谢

细胞海洋

建议上图

1301918986

你的原代是用组织块培养法吗?我们做的组织块原代差不多十四天就可以传代了，当然它没有长满皿的80%，但是克隆部分的细胞已经很密集了。而且，首次传代密度偏低的话，这样它的增值比较缓慢，时间长了细胞形态也就不是很好了。当然传代后的细胞形态和原代是有差别的。

sunjianhua2000

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( W" I, w7 q& [- R( V
% W$ e4 u# w- j# V我做的是组织块培养法。我用的是20*100的皿，当时我的原代只有一盘，传代时间时培养第19天。我消化后传成2盘了，现在细胞已经长4天了，昨天看了感觉形态不是很好，但是感觉到细胞在长。

cactus006

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# j# E5 O! z: y
. ]1 O4 ~$ n6 X7 l楼主的血清加那么高么，血清浓度太高是不是细胞很容易分化呢？我在养原代的时候还添加L-glutamine；我昨天做的脐带原代培养，用组织块儿贴壁法，培养基只能覆盖皿底，不知道今天要不要去换液？请前辈们给予好的建议和指导，谢谢

1301918986

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4 N: f1 ]" k8 U5 U8 o5 I/ S  f7 h' O) i9 M+ j6 r
脐带原代刚开始几天我们是隔天半量换液，而且加的液体不要太多以免组织块漂浮。

urology007

感觉好像传达有些晚，只要局部细胞长满了就该传了，等全部长满势必细胞会老化，传代后也状态不好，另外，传代的时候密度不能太低，否则长的很慢、容易老化凋亡。以上是我个人的经验。

田甜

传代过晚，一般14天左右就差不多传代了。传代后，培养基中血清浓度可以考虑降低或使用无血清培养基培养。不同血清对脐带间充质干细胞的影响好像还很大，会造成细胞传代后形态偏扁平且生长较慢，建议多试试不同批号的血清，找到合适的血清。

jss667795

血清建议用进口的好一点，传代后细胞扁平可能是老化了，细胞消化之前长得过满易老化，也可能是消化手法或者胰酶浓度问题。

帝国黑骑士

感觉好像有几点原因：
* O+ |6 |/ \4 e( S9 v1.传代时间有些晚
* \! p3 m3 `  \2.可能是因为不好消化那所以你笑的时间比较长，影响了细胞的活性， 消化的时候建议加胰酶的时候可以加点盐水或fbs这样消化后也容易就细胞冲下来。! j4 i& \1 U8 Z# j  I& Z
3.原代传的话 建议一传一 ，因为传代密度稀的话，细胞生长慢且形态不好就像你说的那样多是稀且成扁大的样子。