免疫荧光染色

Sophia

大家好！请教一下，关于免疫荧光染色，想要进行双标，就是在一张片子上染两个抗体，具体操作步骤怎么做呀！非常感谢！

dongxin

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; m& H8 C: f& ]4 T, m$ U2 b8 y) I5 c. _- f
是软件自带的功能

zxdlala

回复 dongxin 的帖子* Y, J6 {6 f/ [* X

% R3 Q! I3 W4 U/ j8 ]" b$ C- S你好，请问下怎么用软件叠加啊？

zxdlala

弱弱的问下，免疫荧光是荧光原位杂交吗？

wang3033

一抗分别用兔和小鼠，二抗分别用FITC和罗丹明标记的抗小鼠和抗兔抗体，

rain2402

免疫荧光染色，想要进行双标，染两个抗体，具体操作。( r- I2 D. k3 n6 C
比如你的一抗1是鼠抗微管蛋白的，对应的二抗是绿色荧光标记的羊抗鼠抗体。一抗2是兔抗线粒体的，对应的二抗是红色荧光标记的羊抗兔抗体。步骤是加入一抗1和一抗2，4℃过夜，然后封闭一段时间，加入2种二抗。作用一段时间后就可以去照相了，不同的激发光下会有不同的荧光。单通道的就要单独照了。: w4 G! J( B. ]5 K

dongxin

我也用过激光共聚焦来成像，单通道分别拍照，再用Image J软件叠加，效果也挺好的！, m6 K2 j; ^4 t9 O% u) {
至于封闭液，我们用的就是BSA！
% \  _* j( y. V* }
0 I5 h5 t4 t7 l* G3 M共同学习，进步！

深海鱼

回复 sdjjfangfang 的帖子& w# H: `( u2 g! \3 G$ {& }9 Z

. E/ J/ o: D4 j5 A# y  i我有一问题不懂，您说一抗要不同种属，那么二抗也是相应的两个种属，那用哪个种属的二抗来源的血清封闭呢？我封闭都是用牛血清白蛋白，不解为何要用二抗来源的血清封闭

nihaohao

  严重同意，抗体的选择必须是选择不同种属来源的抗体。+ J1 Y/ Q0 O3 P$ j, l
比如一种选择小鼠来源的抗体，一种选择兔来源的抗体，* p4 X  Y; N7 u! {$ F
选好一抗，然后再选择和一抗向对应的二抗。( ~9 l/ F6 D7 ~( ?  {* _" {
可以两种抗体同时加，也可以先加入一种，然后再加入另一种。如gqs2872022  所说的。: y4 {* _% I) O
这两种方法我以前都用过，感觉差不多，两种抗体同时加可以节约点时间。( z% h2 m# Q# Z$ k$ ]3 ?+ ]9 }1 U

gqs2872022

我们都是用激光共聚焦来成像，这样效果是比较漂亮的。不要在乎成本，要的是效果。# V4 {4 s4 m; o4 z* w3 o
当然没有条件的话可以单通道分别拍照，再用Image J等软件叠加也行。