WB条带丑陋，求鉴定，求指点，煮样不充分orDNA粘稠？

zhenhua

6 A/ P7 _) e5 ~8 X; {5 ^6 @
) P5 j& L5 m) A
呵呵，怎么能说自己的data很丑陋呢？
, ^6 O) h. R: \4 O" i6cm的293T用200ul loading buffer裂解。那你每个泳道上了多少ul呢？
9 f0 b4 Q6 I: S1 n% D如果不定蛋白量得话，每个泳道上50000-100000个细胞。
# c2 d% v4 F7 v还有，你的样品很黏，条带拖尾，说明有很多DNA，而且DNA没有充分打断。  I  D' S+ o) |
这种情况，我一般要把样品煮20-30min，把DNA都打断了。你也可以试试超声的。+ T4 q3 \- c) q, B3 n2 j3 A+ v2 m
最简单的方法是，每个泳道上50000-100000个细胞的量，样品煮20-30min.

zhenhua

回复 7ubo 的帖子: U% Z4 w3 }" @$ N& |+ D
3 n7 q5 M/ G3 y+ ^; N. k
20ul足够。
- d# ?' d0 U8 L煮20-30分钟不会使蛋白降解。! b% r; ~3 H: T* C* l  m( o' Z1 {
不用离心去沉淀。煮完几乎没有沉淀了。1 P3 a1 p6 J1 h' B3 @
可以用actin等高丰度蛋白试试效果。; B% t* T! }4 I# G, I