WB条带丑陋，求鉴定，求指点，煮样不充分orDNA粘稠？

zhenhua

4 r4 Y3 E2 G" [% D; }
+ [3 S& f& A; M; W5 p呵呵，怎么能说自己的data很丑陋呢？! K# j& R) U2 M0 V
6cm的293T用200ul loading buffer裂解。那你每个泳道上了多少ul呢？
# S$ G5 L* F" S: g如果不定蛋白量得话，每个泳道上50000-100000个细胞。2 @% _0 J! K% z  ?  G
还有，你的样品很黏，条带拖尾，说明有很多DNA，而且DNA没有充分打断。
9 d) L6 S' `/ h' ^" G这种情况，我一般要把样品煮20-30min，把DNA都打断了。你也可以试试超声的。
1 d3 i' a& m. {8 C7 n9 u$ t; X' M最简单的方法是，每个泳道上50000-100000个细胞的量，样品煮20-30min.

zhenhua

回复 7ubo 的帖子! J9 l& ~( u5 v# `# a& [) x! f
; z3 c! e) O9 w8 N! \2 k6 H
20ul足够。
7 [  ~$ y7 k8 l' M- c/ ]% r, F9 w煮20-30分钟不会使蛋白降解。: X% Q( H3 M6 |" X2 B
不用离心去沉淀。煮完几乎没有沉淀了。  P" h: [8 q' d8 g6 x
可以用actin等高丰度蛋白试试效果。$ z# g8 e* k- U