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急求:为什么我的小鼠sv129胚胎干细胞一直不贴壁   [复制链接]

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楼主
发表于 2011-6-15 07:36 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
本人养了sv129细胞近三个月,一直是不贴壁,一开始是怀疑细胞密度低,后来加大密度后,还是不贴壁,上面很多漂浮的;传完两代后,细胞数量越来越少,所以现在我想问一下各位同仁,大家在T25cm的培养瓶中,饲养层细胞的密度是多少,ES接种的 密度是多少?
6 H! O, {0 c" T1 i, }7 K此外我培养基用之前过滤,因为镜下渣子多,这样有什么不好的影响吗?培养基中血清的比例是多少?
5 N4 L2 ?2 j# }% {" Y  p4 n附图为培养 两天的ES250x的细胞,实验室条件差,用普通相机拍的,各位战友帮我看一下,问题出在哪里3 V. I/ Z+ |( p- _- ~5 }8 k

4 o. H/ u  Z1 f6 R% C不胜感激
5 a! i5 l+ L0 [& {
; g+ h% _( U; @8 @$ I: a
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沙发
发表于 2011-6-15 07:41 |只看该作者
照片死活传不上,哪位好心的战友先帮我找找原因,都快崩溃了

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优秀版主

藤椅
发表于 2011-6-15 09:29 |只看该作者
首先需要你的图片,另外想问你的129冻存了多长时间。我之前解冻几年前的129,复苏的很不好,养了好几个星期。培养基也是标准的mES medium。
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金话筒 优秀会员

板凳
发表于 2011-6-15 09:40 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
先查查你的培养基为啥出现渣子,质量是否有问题,建议重新配制培养基。
) U# `! M0 M4 P( s* j0 R8 W细胞不贴壁,首先要看你的细胞活性如何,可以尝试一下明胶铺板后再种植,是否能够贴壁?
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报纸
发表于 2011-6-15 09:50 |只看该作者
回复 dilal 的帖子
% s+ K& n$ g( S4 ^) c3 Q
) q7 e# Y" e- I. F1 \明胶铺板后,也不贴壁,呵呵,很冒昧的问一句能否QQ交流一下,我的QQ215826936
+ J7 b/ A8 v( z! m( C* z# s不胜感激

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地板
发表于 2011-6-15 10:00 |只看该作者
回复 第七舰队 的帖子
" ^% H' o2 o+ Q2 d8 J- t
: N5 `4 E; A$ G& S129细胞是最近一个月的,培养基也是别人验证过,别人都用着没问题的,现在就是不贴壁,长得慢,呜呜

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发表于 2011-6-15 10:00 |只看该作者
回复 第七舰队 的帖子
. ]7 \5 ?) q/ c+ `+ |" H
5 @% l* N& U) T5 }6 e129细胞是最近一个月的,培养基也是别人验证过,别人都用着没问题的,现在就是不贴壁,长得慢,呜呜

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发表于 2011-6-15 11:24 |只看该作者
回复 第七舰队 的帖子( b5 L3 `3 o/ t1 \4 u# {7 x
+ x6 {/ @$ a1 f9 Y- E$ q0 k
你的饲养层细胞用什么培养基?长势如何?
- ]$ M9 ?9 N7 S1 ]1 \/ l/ ^培养基渣滓多必不能直接使用,建议重新配培养基,血清最好用胎牛血清,一般15%,过滤后分装至小瓶,每小瓶够一次使用量即可。饲养层细胞不能过密。' |) |! I8 P& n6 v
个人认为小鼠胚胎干细胞还是比较好培养的,关键是准备工作(培养基、消化液、PBS、培养瓶、移液管、环境消毒、灭菌等等)一定要做好。
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小小研究员

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发表于 2011-6-15 18:02 |只看该作者
回复 第七舰队 的帖子" T* L% N9 M  h" n4 I3 N

6 ]1 f( d; {: S# }9 v单个图片不要大于1000kb

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发表于 2011-6-15 19:13 |只看该作者
回复 细胞海洋 的帖子  `# i/ }' \1 p) \3 k
( \6 @: l( ^4 T( _5 q9 c9 c
谢谢昂,呵呵
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