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急求:为什么我的小鼠sv129胚胎干细胞一直不贴壁   [复制链接]

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楼主
发表于 2011-6-15 07:36 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
本人养了sv129细胞近三个月,一直是不贴壁,一开始是怀疑细胞密度低,后来加大密度后,还是不贴壁,上面很多漂浮的;传完两代后,细胞数量越来越少,所以现在我想问一下各位同仁,大家在T25cm的培养瓶中,饲养层细胞的密度是多少,ES接种的 密度是多少?, H7 O5 L( N" b
此外我培养基用之前过滤,因为镜下渣子多,这样有什么不好的影响吗?培养基中血清的比例是多少?$ ]$ O5 h3 M1 p1 [* y
附图为培养 两天的ES250x的细胞,实验室条件差,用普通相机拍的,各位战友帮我看一下,问题出在哪里! `' S8 q8 I+ n: F
. g" X2 [6 R8 @+ Q, @8 z' i$ u
不胜感激
9 c# b" E3 p! d6 u2 f. D+ S1 T2 I/ h& S/ A& E6 F- l# I6 w
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沙发
发表于 2011-6-15 07:41 |只看该作者
照片死活传不上,哪位好心的战友先帮我找找原因,都快崩溃了

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优秀版主

藤椅
发表于 2011-6-15 09:29 |只看该作者
首先需要你的图片,另外想问你的129冻存了多长时间。我之前解冻几年前的129,复苏的很不好,养了好几个星期。培养基也是标准的mES medium。
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金话筒 优秀会员

板凳
发表于 2011-6-15 09:40 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
先查查你的培养基为啥出现渣子,质量是否有问题,建议重新配制培养基。4 X( Y3 G/ N* E, U) D
细胞不贴壁,首先要看你的细胞活性如何,可以尝试一下明胶铺板后再种植,是否能够贴壁?
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报纸
发表于 2011-6-15 09:50 |只看该作者
回复 dilal 的帖子  W7 v+ n% x- z5 I, p+ Z+ T/ R1 E

5 Z% y  A0 \7 m明胶铺板后,也不贴壁,呵呵,很冒昧的问一句能否QQ交流一下,我的QQ215826936. R9 T3 v3 v# j1 w3 ]0 `7 a) f
不胜感激

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地板
发表于 2011-6-15 10:00 |只看该作者
回复 第七舰队 的帖子
( d9 Y  z! i# ~
! ^0 f0 Z0 W7 R8 u, w% Q  [+ l4 O' F129细胞是最近一个月的,培养基也是别人验证过,别人都用着没问题的,现在就是不贴壁,长得慢,呜呜

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发表于 2011-6-15 10:00 |只看该作者
回复 第七舰队 的帖子6 _7 [7 Q: m. z: }0 U7 h
/ X7 Q3 z/ L2 ?' n8 r
129细胞是最近一个月的,培养基也是别人验证过,别人都用着没问题的,现在就是不贴壁,长得慢,呜呜

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发表于 2011-6-15 11:24 |只看该作者
回复 第七舰队 的帖子2 J" ~3 |2 o' x
1 V6 K* |8 d# Y% p3 w" {( r
你的饲养层细胞用什么培养基?长势如何?, c  L, p" L  m2 {% R0 J
培养基渣滓多必不能直接使用,建议重新配培养基,血清最好用胎牛血清,一般15%,过滤后分装至小瓶,每小瓶够一次使用量即可。饲养层细胞不能过密。# I: L; j" H3 j' L4 S  A
个人认为小鼠胚胎干细胞还是比较好培养的,关键是准备工作(培养基、消化液、PBS、培养瓶、移液管、环境消毒、灭菌等等)一定要做好。
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小小研究员

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发表于 2011-6-15 18:02 |只看该作者
回复 第七舰队 的帖子8 u- B! H+ X9 D2 S* o, n! p6 B( {

' v$ `. `' P4 j# y+ X' M  N5 C单个图片不要大于1000kb

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发表于 2011-6-15 19:13 |只看该作者
回复 细胞海洋 的帖子: g4 U: b, d& E9 V0 s1 A& a
3 K6 V  L" D6 M
谢谢昂,呵呵
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