急求：为什么我的小鼠sv129胚胎干细胞一直不贴壁

第七舰队

本人养了sv129细胞近三个月，一直是不贴壁，一开始是怀疑细胞密度低，后来加大密度后，还是不贴壁，上面很多漂浮的；传完两代后，细胞数量越来越少，所以现在我想问一下各位同仁，大家在T25cm的培养瓶中，饲养层细胞的密度是多少，ES接种的 密度是多少？, H7 O5 L( N" b
此外我培养基用之前过滤，因为镜下渣子多，这样有什么不好的影响吗？培养基中血清的比例是多少？$ ]$ O5 h3 M1 p1 [* y
附图为培养 两天的ES250x的细胞，实验室条件差，用普通相机拍的，各位战友帮我看一下，问题出在哪里! `' S8 q8 I+ n: F
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不胜感激
9 c# b" E3 p! d6 u2 f. D+ S1 T2 I/ h& S/ A& E6 F- l# I6 w

第七舰队

照片死活传不上，哪位好心的战友先帮我找找原因，都快崩溃了

friendly0722

首先需要你的图片，另外想问你的129冻存了多长时间。我之前解冻几年前的129，复苏的很不好，养了好几个星期。培养基也是标准的mES medium。

dilal

先查查你的培养基为啥出现渣子，质量是否有问题，建议重新配制培养基。4 X( Y3 G/ N* E, U) D
细胞不贴壁，首先要看你的细胞活性如何，可以尝试一下明胶铺板后再种植，是否能够贴壁？

第七舰队

回复 dilal 的帖子  W7 v+ n% x- z5 I, p+ Z+ T/ R1 E

5 Z% y  A0 \7 m明胶铺板后，也不贴壁，呵呵，很冒昧的问一句能否QQ交流一下，我的QQ215826936. R9 T3 v3 v# j1 w3 ]0 `7 a) f
不胜感激

第七舰队

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! ^0 f0 Z0 W7 R8 u, w% Q  [+ l4 O' F129细胞是最近一个月的，培养基也是别人验证过，别人都用着没问题的，现在就是不贴壁，长得慢，呜呜

第七舰队

回复 第七舰队 的帖子6 _7 [7 Q: m. z: }0 U7 h
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129细胞是最近一个月的，培养基也是别人验证过，别人都用着没问题的，现在就是不贴壁，长得慢，呜呜

hygene

回复 第七舰队 的帖子2 J" ~3 |2 o' x
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你的饲养层细胞用什么培养基？长势如何？, c  L, p" L  m2 {% R0 J
培养基渣滓多必不能直接使用，建议重新配培养基，血清最好用胎牛血清，一般15%，过滤后分装至小瓶，每小瓶够一次使用量即可。饲养层细胞不能过密。# I: L; j" H3 j' L4 S  A
个人认为小鼠胚胎干细胞还是比较好培养的，关键是准备工作（培养基、消化液、PBS、培养瓶、移液管、环境消毒、灭菌等等）一定要做好。

细胞海洋

回复 第七舰队 的帖子8 u- B! H+ X9 D2 S* o, n! p6 B( {

' v$ `. `' P4 j# y+ X' M  N5 C单个图片不要大于1000kb

第七舰队

回复 细胞海洋 的帖子: g4 U: b, d& E9 V0 s1 A& a
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谢谢昂，呵呵