急求：为什么我的小鼠sv129胚胎干细胞一直不贴壁

第七舰队

本人养了sv129细胞近三个月，一直是不贴壁，一开始是怀疑细胞密度低，后来加大密度后，还是不贴壁，上面很多漂浮的；传完两代后，细胞数量越来越少，所以现在我想问一下各位同仁，大家在T25cm的培养瓶中，饲养层细胞的密度是多少，ES接种的 密度是多少？
6 H! O, {0 c" T1 i, }7 K此外我培养基用之前过滤，因为镜下渣子多，这样有什么不好的影响吗？培养基中血清的比例是多少？
5 N4 L2 ?2 j# }% {" Y  p4 n附图为培养 两天的ES250x的细胞，实验室条件差，用普通相机拍的，各位战友帮我看一下，问题出在哪里3 V. I/ Z+ |( p- _- ~5 }8 k

4 o. H/ u  Z1 f6 R% C不胜感激
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第七舰队

照片死活传不上，哪位好心的战友先帮我找找原因，都快崩溃了

friendly0722

首先需要你的图片，另外想问你的129冻存了多长时间。我之前解冻几年前的129，复苏的很不好，养了好几个星期。培养基也是标准的mES medium。

dilal

先查查你的培养基为啥出现渣子，质量是否有问题，建议重新配制培养基。
) U# `! M0 M4 P( s* j0 R8 W细胞不贴壁，首先要看你的细胞活性如何，可以尝试一下明胶铺板后再种植，是否能够贴壁？

第七舰队

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) q7 e# Y" e- I. F1 \明胶铺板后，也不贴壁，呵呵，很冒昧的问一句能否QQ交流一下，我的QQ215826936
+ J7 b/ A8 v( z! m( C* z# s不胜感激

第七舰队

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: N5 `4 E; A$ G& S129细胞是最近一个月的，培养基也是别人验证过，别人都用着没问题的，现在就是不贴壁，长得慢，呜呜

第七舰队

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5 @% l* N& U) T5 }6 e129细胞是最近一个月的，培养基也是别人验证过，别人都用着没问题的，现在就是不贴壁，长得慢，呜呜

hygene

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+ x6 {/ @$ a1 f9 Y- E$ q0 k
你的饲养层细胞用什么培养基？长势如何？
- ]$ M9 ?9 N7 S1 ]1 \/ l/ ^培养基渣滓多必不能直接使用，建议重新配培养基，血清最好用胎牛血清，一般15%，过滤后分装至小瓶，每小瓶够一次使用量即可。饲养层细胞不能过密。' |) |! I8 P& n6 v
个人认为小鼠胚胎干细胞还是比较好培养的，关键是准备工作（培养基、消化液、PBS、培养瓶、移液管、环境消毒、灭菌等等）一定要做好。

细胞海洋

回复 第七舰队 的帖子" T* L% N9 M  h" n4 I3 N

6 ]1 f( d; {: S# }9 v单个图片不要大于1000kb

第七舰队

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( \6 @: l( ^4 T( _5 q9 c9 c
谢谢昂，呵呵