急求：为什么我的小鼠sv129胚胎干细胞一直不贴壁

第七舰队

本人养了sv129细胞近三个月，一直是不贴壁，一开始是怀疑细胞密度低，后来加大密度后，还是不贴壁，上面很多漂浮的；传完两代后，细胞数量越来越少，所以现在我想问一下各位同仁，大家在T25cm的培养瓶中，饲养层细胞的密度是多少，ES接种的 密度是多少？: `$ F  [+ L' p  ]7 J
此外我培养基用之前过滤，因为镜下渣子多，这样有什么不好的影响吗？培养基中血清的比例是多少？! g2 e# F- t0 ]+ W7 O8 E
附图为培养 两天的ES250x的细胞，实验室条件差，用普通相机拍的，各位战友帮我看一下，问题出在哪里8 _; x% @) I3 `0 q1 L- g
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不胜感激. v/ N6 P: ?% S* r7 q
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第七舰队

照片死活传不上，哪位好心的战友先帮我找找原因，都快崩溃了

friendly0722

首先需要你的图片，另外想问你的129冻存了多长时间。我之前解冻几年前的129，复苏的很不好，养了好几个星期。培养基也是标准的mES medium。

dilal

先查查你的培养基为啥出现渣子，质量是否有问题，建议重新配制培养基。
1 [. }# t1 @% T. j' Q细胞不贴壁，首先要看你的细胞活性如何，可以尝试一下明胶铺板后再种植，是否能够贴壁？

第七舰队

回复 dilal 的帖子" T* N/ t! g! O& A; Z1 h
6 @8 H0 q9 C# |4 a9 \" Z- V
明胶铺板后，也不贴壁，呵呵，很冒昧的问一句能否QQ交流一下，我的QQ2158269360 a  E% T8 t7 ?- m9 S/ I( ^
不胜感激

第七舰队

回复 第七舰队 的帖子8 V# z0 r6 C. L8 ~* {9 i" o$ _7 H3 w
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129细胞是最近一个月的，培养基也是别人验证过，别人都用着没问题的，现在就是不贴壁，长得慢，呜呜

第七舰队

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' y. c3 z: l- v' z( |3 p& ~129细胞是最近一个月的，培养基也是别人验证过，别人都用着没问题的，现在就是不贴壁，长得慢，呜呜

hygene

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' {- F; |/ x9 Q* t# d你的饲养层细胞用什么培养基？长势如何？- L' a( F- W1 l+ B4 s, Z
培养基渣滓多必不能直接使用，建议重新配培养基，血清最好用胎牛血清，一般15%，过滤后分装至小瓶，每小瓶够一次使用量即可。饲养层细胞不能过密。
# e9 Q+ O9 _6 T. J8 U1 g个人认为小鼠胚胎干细胞还是比较好培养的，关键是准备工作（培养基、消化液、PBS、培养瓶、移液管、环境消毒、灭菌等等）一定要做好。

细胞海洋

回复 第七舰队 的帖子  J% A: T8 }" h5 W6 q% W( h- T5 c

4 N& |/ X# P9 n& o$ o5 l单个图片不要大于1000kb

第七舰队

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4 u. i: c6 A+ d1 n0 X' @
8 b5 o# ?% T/ p5 b! Y: ~1 ]! t谢谢昂，呵呵