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always_wp

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发表于 2011-6-20 08:27 |只看该作者

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" X- u4 t4 u' N5 ^
是不是说相当于悬浮转染了呢，就在试管里进行转染后4h的孵育

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wwy551

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发表于 2011-6-19 20:46 |只看该作者

回复 always_wp 的帖子

看你要往人还是鼠的ES/IPS里面转基因了，我做过很多次向人的ES里面转基因。Dispase消化HESC，吹打成很小的细胞团块（注意不要吹打成单细胞，人的ES或IPS单细胞形成克隆的能力不好，如果是鼠的ES或IPS应该就没问题），用0.5毫升HESM和0.5毫升浓缩后的毒液在15毫升离心管里悬浮感染细胞团块，记得加1000*Polybrane。37度孵育2~4个小时，然后转到MEF FEEDER上（事先准备好MEF FEEDER，把毒液感染的ES细胞团块转来之前，先用DF12洗干净MEF），加新鲜培养液至合适体积，过夜后第二天换液。