急用丝裂霉素过夜处理MEF

congxiaoran

请教各位用丝裂霉素过夜处理饲养层需要多大浓度？多长时间？多谢！

yangpan521

买成品的丝裂霉素共2mg,加入2ml的无血清培养基混匀，然后分装，使用时按100x 加就行了，处理时间不能超过2个半小时。

牙牙丫丫123

可以用10mlDMEM溶解2mg成品粉末，4℃过夜避光溶解，第二天过滤分装，20X浓储，-20℃保存，工作浓度为10ug/ml。使用时细胞达到正常传代密度即可，处理时新鲜培养液中加入相应量地丝裂霉素C

congxiaoran

回复 yangpan521 的帖子4 e$ v. l/ F* E2 `8 X
6 r% k# j9 p1 X' j) q
谢谢，还想请教下您试过过夜处理吗？

congxiaoran

回复 牙牙丫丫123 的帖子( s1 x, B  ~4 s% e6 B# Q+ Z
! h% j* {- y% Q6 Z+ l
您的这种配液使用时是过夜处理吗？

前途似锦

过夜处理，不好吧，我有次失误，但是你看细胞不会死，但是不敢用了

前途似锦

过夜处理，不好吧，我有次失误，但是你看细胞不会死，但是不敢用了

yangpan521

回复 congxiaoran 的帖子
8 F! C" Y8 [$ C7 r
( S* o7 S' S& D$ z7 |4 D% T. e没有，这样的浓度处理超过三个小时，细胞就会死的差不多了，已经不能在做饲养层。

牙牙丫丫123

回复 congxiaoran 的帖子: F  ]1 k8 X3 M" B  o" j7 ~% H
8 \& e1 F* G' y4 O8 D& [
配制丝裂霉素的时候是过夜，处理细胞的时候不要超过2个小时, g+ S0 e6 s9 T1 l) J

scottist

浓度为10ug/ml，可用PBS分装为100X的，-20度冻存，yamanaka的nature protocol时间是2.5h，个人认为处理不超过3h就可以。