MEF状态的影响因素有哪些？

christophe

最近连续做了几批MEF，操作程序差不多，但得到的MEF状态却大不相同，有的传到P3都没问题，细胞饱满增殖旺盛；有的刚分离的p0状态都很差，细胞老化严重。请有经验的给分析一下影响MEF的状态的因素有哪些呢？怎么样才能得到状态好的MEF呢？最好从小鼠的饲养开始说起，谢了先！

huangcong1988

影响MEF状态的因素很多，其中培养条件是很重要的，我之前有个帖子写得很很详细；另外，根据你的描述，你应该是直接从小鼠胚胎中分离的MEF吧？从活体中分离MEF的操作也很重要，我的帖子中都写了。还有你养的MEF是用来干嘛的，做饲养层还是用来诱导的？

christophe

回复 huangcong1988 的帖子3 b4 Q4 D: V; e! G4 `  v. N( d
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不好意思，上你的主页找不到你的帖子啊？麻烦您帮我找一下链接
' h! F% _0 g# N4 z我是从D13.5天孕鼠中分离MEF的，ICR是用来feeder用，C57小鼠MEF用来做诱导的，感觉ICR的MEF 状态还可以，但C57BL6的MEF就不是太好了,MEF的质量是不是和品系有些关系（一个是远交系一个是近交系）？ 谢谢

huangcong1988

呵呵，不好意思，我记错了，那是293T的，另外发一个MEF的帖子，不好意思

pla269

首先是分离出来的状态怎么样，然后是包被，然后就是你的培养基了，都很重要，每一个小细节都马虎不得

christophe

回复 pla269 的帖子
' M6 V5 k* u/ o# c% ?0 E
2 d/ Z0 g# a. S2 S$ e  m# q谢谢你！5 n6 C7 |7 r; P  x1 h
最近有一批MEF分离出来的时候感觉状态就不好，以后肯定是越培养越不好了，但不知道是什么因素造成的刚分离就不好，是那些因素影响了母鼠和胚胎的质量呢？盘子也是0.1gelatin包被的，培养基是hyclone high glucose DMEM(不是原装进口，据说是进口粉末配成分装的，五十人民币左右一瓶)+15%FBS+1%NEAA+1%P/S,不知是哪个环节影响的？

christophe

回复 huangcong1988 的帖子
, `5 @' W) z9 w/ y2 r3 P  L9 M7 ]+ B) t2 m( M+ h
呵呵，没关系，还请你给传授一下经验，多谢！

pla269

鼠的问题是分批次的，很难把握，其实主要你分离的手法，有时越是分不好反而分的很快，可能是研磨的很了，还有你的筛子怎么清理的，好用吗，堵不堵？再有就是现在温度高，考虑一下环境变化，hyclone high glucose DMEM，我也用过，建议从公司代理定，有一次，我刚一开盖，一个黑色杂质就在瓶口，市面上的cibco几乎都是假的

christophe

回复 pla269 的帖子+ M( [. S: r3 y# M. e
8 E. c8 Z6 y% N+ y' r* [) q: a/ q
OK,thank you! ( W( Y( t0 |" y4 t3 r
你的意思是hyclone high glucose DMEM还是要订原装进口的吗？大概多少钱一瓶呢？

pla269

找正规的代理就行