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以前发过一个请教间充质干细胞的帖子,大家讨论很热烈,帮助很大http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... age%3D1-page-1.html( w+ y9 }3 n* B: j9 A
现在有近两个月过去了,又有新的问题出现了,大家再一起探讨探讨吧。
' o; s, D* O9 X3 R3 b& i1、脐带MSC我用的组织块法和酶消化法,都失败了。组织块大约一个月才长出细胞,根本长不满,很快就老化了。酶消化法是用胶原酶2消化30min,还有消化1h的,100钼筛网过滤,接种的时候都见到很多细胞,但是不贴壁,换两回液基本就啥都没有了。培养基用的15%FBS 的HDMEM。太失败了,急盼指导!
2 t) \! D$ \# X: W) N1 Q2、骨髓的MSC倒是都长出来了,但是我觉得长得有些慢。3天爬出来,再长7天能传一代。全髓法和Ficoll法都用了,差异不大。培养基跟脐带的一样,也没加生长因子。各位做骨髓的都是怎么个情况?应该能再快一点吧?另外有人加bFGF维持干性,有没有文献支持?浓度多少?
4 p& j) R4 Y( V$ {9 `2 {3、流式鉴定做得比较诡异,10^5~10^6的细胞,散点图上不成团,细胞特别散,做了几回都这样,老师说是细胞状态不好,可也不能每次都不好吧。圈门里面的阳性率倒是挺高的,可是门外面的那么多细胞就不知道是什么了,也没法说我养的细胞纯度怎么样。
5 w: j" p/ l V1 }1 | }, `4、诱导分化还没进行。请教各位第几代进行诱导比较好?3-5可以吗?复苏后的细胞需要传几代再诱导吗?& k" p/ @6 M6 L. g+ S# \4 Q- [! T
问题比较多,没说清的我再补充啊,希望大家帮忙分析分析,多多交流! |
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