请教脐带、骨髓MSC培养及鉴定

mason658616

以前发过一个请教间充质干细胞的帖子，大家讨论很热烈，帮助很大http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... age%3D1-page-1.html( w+ y9 }3 n* B: j9 A
现在有近两个月过去了，又有新的问题出现了，大家再一起探讨探讨吧。
' o; s, D* O9 X3 R3 b& i1、脐带MSC我用的组织块法和酶消化法，都失败了。组织块大约一个月才长出细胞，根本长不满，很快就老化了。酶消化法是用胶原酶2消化30min，还有消化1h的，100钼筛网过滤，接种的时候都见到很多细胞，但是不贴壁，换两回液基本就啥都没有了。培养基用的15%FBS 的HDMEM。太失败了，急盼指导！
2 t) \! D$ \# X: W) N1 Q2、骨髓的MSC倒是都长出来了，但是我觉得长得有些慢。3天爬出来，再长7天能传一代。全髓法和Ficoll法都用了，差异不大。培养基跟脐带的一样，也没加生长因子。各位做骨髓的都是怎么个情况？应该能再快一点吧？另外有人加bFGF维持干性，有没有文献支持？浓度多少？
4 p& j) R4 Y( V$ {9 `2 {3、流式鉴定做得比较诡异，10^5~10^6的细胞，散点图上不成团，细胞特别散，做了几回都这样，老师说是细胞状态不好，可也不能每次都不好吧。圈门里面的阳性率倒是挺高的，可是门外面的那么多细胞就不知道是什么了，也没法说我养的细胞纯度怎么样。
5 w: j" p/ l  V1 }1 |  }, `4、诱导分化还没进行。请教各位第几代进行诱导比较好？3-5可以吗？复苏后的细胞需要传几代再诱导吗？& k" p/ @6 M6 L. g+ S# \4 Q- [! T
问题比较多，没说清的我再补充啊，希望大家帮忙分析分析，多多交流！

大少爷

脐带MSC组织块法，原代时培养基不能加得过多，刚能覆盖培养瓶底部即可，过6天左右换液一次（全量），此时的组织块贴壁效果不是很好好，再过六天左右半量换液，组织块贴壁效果已很好，细胞已经长出来了，再过5天左右可以收获（如果生长情况不好，再次半量换液）。

1301918986

恩，我也有相同的问题。

yuyabinbin

请问一下你们流式做哪几个抗体

tangyvhuang

没道理啊，刚看了一下楼主给的链接，已经很详尽了不可能做不出来啊

sj842563

同样的问题啊！！

xuchao717

1.培养基里不能含有太高浓度的血清，15%有点高了，最多10%。血清质量要好，最好是HYCLONE的。. H- O7 @6 o! w$ s' ?; b& }
2.我用组织块贴壁法8天就可以传代了，4天就有细胞爬出。我用的培养基是无血清的Fasgrow.