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请教脐带、骨髓MSC培养及鉴定 [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2011-7-3 19:44 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
以前发过一个请教间充质干细胞的帖子,大家讨论很热烈,帮助很大http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... age%3D1-page-1.html( w+ y9 }3 n* B: j9 A
现在有近两个月过去了,又有新的问题出现了,大家再一起探讨探讨吧。
' o; s, D* O9 X3 R3 b& i1、脐带MSC我用的组织块法和酶消化法,都失败了。组织块大约一个月才长出细胞,根本长不满,很快就老化了。酶消化法是用胶原酶2消化30min,还有消化1h的,100钼筛网过滤,接种的时候都见到很多细胞,但是不贴壁,换两回液基本就啥都没有了。培养基用的15%FBS 的HDMEM。太失败了,急盼指导!
2 t) \! D$ \# X: W) N1 Q2、骨髓的MSC倒是都长出来了,但是我觉得长得有些慢。3天爬出来,再长7天能传一代。全髓法和Ficoll法都用了,差异不大。培养基跟脐带的一样,也没加生长因子。各位做骨髓的都是怎么个情况?应该能再快一点吧?另外有人加bFGF维持干性,有没有文献支持?浓度多少?
4 p& j) R4 Y( V$ {9 `2 {3、流式鉴定做得比较诡异,10^5~10^6的细胞,散点图上不成团,细胞特别散,做了几回都这样,老师说是细胞状态不好,可也不能每次都不好吧。圈门里面的阳性率倒是挺高的,可是门外面的那么多细胞就不知道是什么了,也没法说我养的细胞纯度怎么样。
5 w: j" p/ l  V1 }1 |  }, `4、诱导分化还没进行。请教各位第几代进行诱导比较好?3-5可以吗?复苏后的细胞需要传几代再诱导吗?& k" p/ @6 M6 L. g+ S# \4 Q- [! T
问题比较多,没说清的我再补充啊,希望大家帮忙分析分析,多多交流!
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沙发
发表于 2011-7-4 09:16 |只看该作者
脐带MSC组织块法,原代时培养基不能加得过多,刚能覆盖培养瓶底部即可,过6天左右换液一次(全量),此时的组织块贴壁效果不是很好好,再过六天左右半量换液,组织块贴壁效果已很好,细胞已经长出来了,再过5天左右可以收获(如果生长情况不好,再次半量换液)。
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藤椅
发表于 2011-7-6 11:33 |只看该作者
恩,我也有相同的问题。

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板凳
发表于 2011-7-6 16:45 |只看该作者
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请问一下你们流式做哪几个抗体

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报纸
发表于 2011-7-6 22:39 |只看该作者
没道理啊,刚看了一下楼主给的链接,已经很详尽了不可能做不出来啊

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地板
发表于 2011-7-7 09:14 |只看该作者
同样的问题啊!!

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发表于 2011-7-13 17:51 |只看该作者
1.培养基里不能含有太高浓度的血清,15%有点高了,最多10%。血清质量要好,最好是HYCLONE的。. H- O7 @6 o! w$ s' ?; b& }
2.我用组织块贴壁法8天就可以传代了,4天就有细胞爬出。我用的培养基是无血清的Fasgrow.
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