经历两次BMSC提取失败后终于看到曙光，在此感谢大家的帮忙！分享一下实验改进

taoli10000

上次发帖求助，多谢各位的建议，终于在这一次提取BMSC看到希望，讲讲我的实验改进吧。。。分享一下，也希望大家给点进一步的建议
+ H8 q7 R! }6 [$ U1 最初是提取长骨和股骨，每根骨头放T25一瓶，感觉细胞密度太低，然后就改成两根骨头放一瓶，长骨和股骨分开，发现股骨的活性要号很多，密度要大很多，提取的股骨细胞大约5天就长满0 R0 F" o( O/ P9 u; ]+ p6 S0 E  c4 {
2 血清浓度由大约10%提高至20%，打算在传代时再用10%，明天看细胞状况，希望它们健健康康$ }  e' @. i: H5 r0 l* m
3 考虑到谷氨酰胺的可能影响，在买的GIBCO的培养基中另外又加了1%的谷氨酰胺- J0 b5 t3 \' u- f# X
4 在配培养基的时候竟然忘记加双抗，不过庆幸的是细胞还好没有染菌。2 p8 @& n* I  x8 V

4 |$ {  V1 t+ r* _& K6 U目前准备传第二代了，想要确定到底血清还是谷胺胺酰胺有多大影响，希望各位给点建议哦！感觉两根股骨放一瓶T25密度还是挺大的。第一次传代一瓶T25传了一瓶T75，大概三天就可以铺满。。。
# `4 o) |+ _5 R9 p4 B! p1 \3 j! ?- `+ J6 j3 m0 D
呵呵，开心哦！等待准备接下来的实验，希望一切顺利！再次感谢大家喽！

皮搋子

LZ请考虑一下，三天长满的话是否密度太大？8 d# J7 u: N$ p/ T' a
3 X2 ?( w$ d5 h, [
这个时候细胞还未伸展开来，大部分都是圆形。这个时候传代的话细胞状态不好，过了几代就开始老化！

iceyang

养大鼠的BMSC其实不难，我一直就用普通的DMEM+10%FBS+双抗来养，很好，传5-6代没什么问题，一般一只大鼠的2个股骨和2个胫骨接种一个10CM的大皿，2-3天初次换液，6天左右1传2或者1传3

taoli10000

回复 皮搋子 的帖子
' m" [% Q( K# l  f. \% e; G+ ^
% S+ D7 ]. `/ X9 i* o不啦，细胞不是圆形的，应该是P0的时候需要比较长时间，后面的话应该差不多3到4天，早晨刚刚看了，一片一片的漩涡状细胞，完全长满， 状态应该没错。嘿嘿，谢谢你的建议，我考虑过，感觉细胞密度确实有点大，我都是1传3，但是又怕1传4养不活。。。

taoli10000

回复 iceyang 的帖子0 |% r  x1 i! e" b  K

: }" \" `. A0 m嗯，养起第一次后面就有信心些啦，打算逐渐放宽条件，让它们在艰苦点的条件下茁壮成长。。嘿嘿

gact

回复 taoli10000 的帖子( R) b9 e" K" H) D4 D' |/ ?

  U6 n0 m9 t2 W2 z- \2 q) c发贺电，，，B-MSC是mouse的？
! D6 Q6 W+ @: z$ F+ g; F- y

yishengyouwoly

回复 taoli10000 的帖子
- J& u2 P7 J! @# r: R8 G
6 c9 a$ G9 O+ k. `+ U9 U恭喜你养这么好，你养的是sd大鼠吗？用的是全骨髓培养法还是密度梯度法？我是用全骨髓法，感觉杂细胞多，而且p2开始细胞形态就不好了。有战友建议用密度梯度离心和GIBICO的血清培养。

1301918986

回复 taoli10000 的帖子
/ }/ T: [6 W. ~; L; c, j+ O, K( D9 g
谢谢你的分享，我最近在养兔BMSC，原代总是那么不顺利。看了你的实验下次在改进一下，希望能成功。

taoli10000

回复 yishengyouwoly 的帖子
2 R: w3 |. ]6 s  j  N9 ?' t& Z; o' M# M
% @2 }" \! Z  Z7 r/ z( P我用的是SD大鼠全骨髓培养，后面的细胞鉴定还没做的，据我了解一般都是在第四代的时候做流式可以达到百分之九十几了

taoli10000

回复 gact 的帖子+ F6 {+ A. t$ Q, y3 l2 }' C$ _, N8 T

. z- O( H' a# f) T: \# o; cRat的，呵呵  g+ N/ |$ ?9 s( z& `! @