胚胎干细胞感染效率低

ningtinglu

为什么用逆转录病毒感染ESC的效率这么低啊？上次包毒用GFP作control基本没有克隆绿。。。。听说慢病毒的效率要高一些。各位大侠给解释一下原理，谢谢

zm19900508

回复 christophe 的帖子2 z& I$ r( j  k  z9 b

3 A2 r2 F$ M& a) F" y8 y请问关于MMLV区域突变了的retroviral的具体信息，比如全称，公司等。多谢啦

christophe

回复 ningtinglu 的帖子* V  N  ~4 m. h8 f1 Z, E3 \
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逆转录病毒转导ES的话，一般会有一个转录沉默现象，所以你的目的基因表达不了。看到有的公司推出MMLV区域突变了的retroviral表达载体，说可以在ES中高表达，但没试过。一般都是用lentivirus或者电转和脂质体的方法。另外慢病毒感染mES需要注意的几点是：
$ ?7 S5 O. |( a1、用病毒的话需要高速离心浓缩一下病毒，感染293T测一下病毒滴度，感染mES一般MOI值要高于50.5 h  U0 t- ?; A( S
2、启动子不要用CMV的，用EF-1a的会好很多。其他CAG PGK MSCV的都要比CMV的在ES当中启动效率要高。* `& H2 S% j0 j1 L- U8 t% b