胚胎干细胞感染效率低

ningtinglu

为什么用逆转录病毒感染ESC的效率这么低啊？上次包毒用GFP作control基本没有克隆绿。。。。听说慢病毒的效率要高一些。各位大侠给解释一下原理，谢谢

christophe

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! g3 u( F6 y! W9 J* z, _
逆转录病毒转导ES的话，一般会有一个转录沉默现象，所以你的目的基因表达不了。看到有的公司推出MMLV区域突变了的retroviral表达载体，说可以在ES中高表达，但没试过。一般都是用lentivirus或者电转和脂质体的方法。另外慢病毒感染mES需要注意的几点是：
9 v. J2 ~3 b+ R1、用病毒的话需要高速离心浓缩一下病毒，感染293T测一下病毒滴度，感染mES一般MOI值要高于50.1 D1 G, T2 C# d2 `& Z
2、启动子不要用CMV的，用EF-1a的会好很多。其他CAG PGK MSCV的都要比CMV的在ES当中启动效率要高。
: v- K2 G$ Z1 F( L( D4 d, W

zm19900508

回复 christophe 的帖子+ }2 L  g% r/ i6 B( U3 ^
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请问关于MMLV区域突变了的retroviral的具体信息，比如全称，公司等。多谢啦