胚胎干细胞感染效率低

ningtinglu

为什么用逆转录病毒感染ESC的效率这么低啊？上次包毒用GFP作control基本没有克隆绿。。。。听说慢病毒的效率要高一些。各位大侠给解释一下原理，谢谢

zm19900508

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请问关于MMLV区域突变了的retroviral的具体信息，比如全称，公司等。多谢啦

christophe

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: e* c0 d, l7 {; i6 b- V
5 \3 W( |, h0 G5 T; |" x逆转录病毒转导ES的话，一般会有一个转录沉默现象，所以你的目的基因表达不了。看到有的公司推出MMLV区域突变了的retroviral表达载体，说可以在ES中高表达，但没试过。一般都是用lentivirus或者电转和脂质体的方法。另外慢病毒感染mES需要注意的几点是：3 |$ }& L; `/ S9 Y5 I+ e: A# F7 ~0 |
1、用病毒的话需要高速离心浓缩一下病毒，感染293T测一下病毒滴度，感染mES一般MOI值要高于50.
3 |8 P2 b5 ^9 A! C/ G+ @* `2、启动子不要用CMV的，用EF-1a的会好很多。其他CAG PGK MSCV的都要比CMV的在ES当中启动效率要高。7 {) p0 ]3 O6 p2 c( \% N