与个体基因型致敏DC共培养可增强CIK对多发性骨髓瘤细胞的杀伤活性

deron

主题：与个体基因型致敏DC共培养可增强CIK对多发性骨髓瘤细胞的杀伤活性
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/ U% _8 Y1 j- g& ~( y4 C6 j' t说明：原文来自haematologica，干细胞之家新闻小组成员deron翻译（转帖请注明）
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) y2 R6 \8 A6 k. U翻译内容：$ ^( Y# u; H& R/ x
很多学者报道多发性骨髓瘤（MM）特异性抗原致敏的树突状细胞（DC）在体内外应用的研究，这种DC细胞用以对MM进行免疫治疗。数据显示包括T细胞在内，整个固有免疫系统均对MM有毒性反应。这里，我们检测了细胞因子诱导杀伤性（CIK）细胞对骨髓瘤细胞的细胞毒作用。这种多克隆效应群体包含T细胞、NK细胞和NKT细胞。& o# ]  d! H( V8 }
设计和方法7 l8 H6 U5 p0 N) d1 {' ^& }. C6 S
从MM病人白细胞层或血液中培养出的CIK细胞，与自体基因型致敏的DC细胞共培养。乳酸脱氢酶释放试验检测细胞毒作用。  r; ^, l- V0 t! m& q' D! y& Y
结果4 t* x2 e0 u8 n% t3 S
CIK细胞能够以低的效应/靶细胞比率溶解MM细胞。在与特异性致敏DC细胞共培养后，上述效应明显增强（83.8%的溶解率，效应/靶细胞比为16：1）。用干扰素γ分泌型磁珠分选后，CIK细胞以较低的效应/靶细胞比（5：1）达到最高的细胞毒作用。在完全自体环境中富集一位MM患者的CD138+细胞后，CIK细胞也呈现出高细胞杀伤活性（54.4%溶解率，效应/靶细胞比为6：1）。有趣的是，(CIK)没有针对骨髓CD138-片段的细胞杀伤活性。! B, |9 P; M  E5 b: ^
说明和结论
7 Q6 m' _( _/ K& V% _( x) i用效应细胞的混杂群体组分，我们能够激活固有和适应性免疫系统对抗骨髓瘤细胞。CIK细胞对MM细胞表现出高溶解活性，且这种活性在（CIK）与抗原特异性致敏DC细胞共培养后，能够得到加强。2 ~2 A$ }6 x- e' N
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原文：   

deron

关于DC&CIK培养的protocol，这篇也算是很经典的了
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* r# r! C! N/ n# V7 p3 A' d" VDC培养/ r+ W% k- g7 N: X* L
用ficoll密度梯度离心法，从健康供者或从MM患者血液中分离出外周血淋巴细胞。血液抽取遵循当地伦理委员会方案标准。细胞以5×106/ml的密度，在含10%自体热灭活血清的1640液中，六孔板中贴附1小时。未贴壁细胞收集用以培养CIK细胞。贴壁细胞在2ml/孔的培养基中培养，培养基成分为10%自体热灭活血清、750U/ml粒/巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和500U/ml白介素4。
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CIK细胞培养: `4 U; P; U- [: S/ w0 P* m5 c# O
0天        ，干扰素γ1000U/ml。) O6 t9 l% k* U3 B; Q- r; _* ^$ L
24h孵育后，50ng/ml抗CD3，100U/ml白介素1，300U/ml白介素2。
' t8 H( b1 }- V$ F+ f" o细胞在37℃、5%二氧化碳环境中培养，每3天以3×106/ml的密度补充新鲜培养基和IL-2。
' ^5 V, }  ]; h# k' V  [* A完全培养基组分：10%FBS、25mM Hepes、100U/ml青霉素和100ug/ml链霉素。
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+ O$ T! w5 P8 x) x$ Z- P* O研究者也在结果中观察到CIK细胞可以以低效应/靶细胞比率杀伤MM细胞，在与致敏DC共培养后可以明显增强这种杀伤效应