转化的问题

huangcong1988

由于铺板前吹打沉淀时起了很多沫子，铺板铺得有点厚，结果长出的菌细而密，挑菌很不容易，不知道是为什么

Learner

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3 n2 A. s9 k" X& h  h5 T) P我一般都是铺两个板，10ul一个，100ul一个，这样无论菌密度高低都可以挑出单个菌落。

xiangchou812

可能是你的转化效率很高，也可能时抗生素出现问题或者是质粒弄混了。

rain2402

第一种可能性是你的感受态效果太好了，转化效率太高了。第二种是你的培养皿正置了，蒸发的水流到培养基上了，导致菌连成一片。你找下原因就知道了。:'(

luoziwei

这几天我也做这个，经过几次询问与摸索，终于能做出来了！我转化的菌也有连成一片的，但在旁边也有单个菌落的，太多了，他们说一般要挑几十个，我就挑了几个，呵呵，结果PCR还好了，同志们，加油，不要灰心！

luoziwei

这几天我也做这个，经过几次询问与摸索，终于能做出来了！我转化的菌也有连成一片的，但在旁边也有单个菌落的，太多了，他们说一般要挑几十个，我就挑了几个，呵呵，结果PCR还好了，同志们，加油，不要灰心！

huangcong1988

回复 xiangchou812 的帖子. P- }; y& n: N: G1 J
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是的，质粒稀释得不够，只稀释了20倍，可能是因为浓度太高了，而且质粒转化效率很高

huangcong1988

回复 luoziwei 的帖子& q1 Y- s2 G% F* B8 Y
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是啊，一般挑菌都是挑单个的菌落，不过我的长得太密，周边又没怎么长，应该是在铺板时候没铺匀吧？

huangcong1988

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* r% S$ Z* i/ _# e) w3 \应该是转化效率太高了吧，那个氨苄在培养基中的浓度是多少？还有一般氨苄是1克一小瓶的粉末，你们是怎么稀释的，怎么配的？

绿雪

如果是做质粒转化而不是连接产物转化的话，建议不用复苏培养，直接热击冰浴完就涂板，长得很漂亮的，我都是这么做的。