原代MEF消化

runsong

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/ j1 {6 ]5 X% s* A# F6 n* s8 R: t! @! F这是很正常的，MEF原代培养简单的话就先仔细剪碎，至少剪300下，再加入大量胰酶（不要小气）37℃消化20min左右，成为粘稠透明状液体。用3倍于胰酶体积的培养液中和，直接接入培养皿里就行了。粘液里的细胞会自己迁出、贴壁的。待其贴壁后及时换液。
' B3 n9 [- x: u; Y( K3 ^有两点需要注意：1、要充分剪碎，2、要用充足的胰酶。
6 ]0 q2 y7 }! \2 X2 u6 l% S3 W- p有两点无需注意：1、不必消化为单细胞，2、培养液里的胰酶不太影响细胞生长。（如果不放心的话可以中和后离心，弃掉一些液体，不过不要弃掉粘液，上清也弃不多）; g/ @+ \: m0 _

( B8 r8 u/ B6 p2 |6 \7 C$ A补充一点：我不是牛人，四楼坐板凳的才是。

runsong

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  w( o; p% i( n6 h, w
# Q3 ?. b2 V6 B( s( t+ |是的，但这也是无奈之举。
. q! P' Y" N6 k) F胰酶并不适合做mef，很难消化为单细胞。选用其他的方法其他的酶效率会高几倍。

runsong

8 l' ~# f9 C, j' d' e# O# [

1 a9 E0 R0 x. c# Q回复 nibirucome 的帖子! j  J, T2 v: b, @$ t' r) ]1 o

: L: G* h; s8 Q4 T) ]8 v7 G4 D5楼的方法应该可以，9 m+ z% D: {, F# T- y/ Z
不过好像应该是0.05%的trypsin