关于质粒浓缩的问题

huangcong1988

之前提的质粒，测了一下浓度，有的可以，有的浓度太低了，我想知道怎么浓缩质粒，师兄说可以再过柱，我不知道怎么再过柱，因为现在质粒是溶液了，即使加到柱子里，离心，应该质粒跟ENDO-FREE SOLUTION 会一起下来吧（去内毒素提的）？求解释

langziforever

如果有冷冻干燥仪，可以在里面甩干一下，不用完全干燥，只需要让体积减少些，然后再调节到需要的浓度就行了，如果没有干燥仪，就用NaCl和无水乙醇用标准的步骤沉降一下，然后再溶解在较少的体积，但是沉降过程也会有损失，所以，沉降在-20C、4hrs以上，同时再溶解时尽量少溶一些！

wang3033

加质粒1/10体积的NaAC(pH5.2)，然后加等体积的异丙醇，混匀10000rpm离心5分钟，用70%酒精洗两次，加所需体积的无菌TE即可得到想要浓缩的质粒了。

huangcong1988

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* I! s/ Z/ q. K* }& N' t; Q$ m3 D! Y8 \2 w$ d3 [: s6 C
谢谢，我用的是去内毒素提质粒的，所以可能重新过柱可能比较保险一些，我理解的重新过柱是加乙醇，之后就转移到柱中，其余同下面的

wang3033

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+ ~5 a/ p8 Z7 m
4 p" S+ g4 k0 m! m3 N过柱损失大一点，我说的沉淀法几乎一点不损失质粒。

hygene

如果是用于细胞转染的话， 确实需要重新过柱，去内毒素的。

christophe

回复 hygene 的帖子
: Z( p+ _# {" _, q3 |6 M
$ h! Z# G$ A% C) r5 G/ H那手工提取的质粒，不是没有过柱子去内毒素这一步吗？2 M( c3 o! e, o( e0 R* t! E( g
所以乙醇沉淀浓缩的方法应该也是可以的吧

hygene

回复 christophe 的帖子
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7 }3 ^: S0 p: H) t: ]# P手工提取确实没有柱子，但是这样的质粒没有去除内毒素，用于细胞转染会导致细胞大量死亡，甚至最终实验失败。  @, y8 j3 X! m/ u( m) Y7 A" K4 F

hygene

回复 christophe 的帖子% s0 M2 p* z  C& [+ E) A6 l( a# R
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手工提取确实没有柱子，但是这样的质粒没有去除内毒素，用于细胞转染会导致细胞大量死亡，甚至最终实验失败。. i3 T) f, U7 K: V  Y& N

hygene

回复 christophe 的帖子" R# u2 x' y, g0 y; M7 J

6 z. T' H5 Z6 B$ V: u手工提取确实没有柱子，但是这样的质粒没有去除内毒素，用于细胞转染会导致细胞大量死亡，甚至最终实验失败。% n7 E+ X& T3 y6 c6 Q( a  a6 |