关于质粒浓缩的问题

huangcong1988

之前提的质粒，测了一下浓度，有的可以，有的浓度太低了，我想知道怎么浓缩质粒，师兄说可以再过柱，我不知道怎么再过柱，因为现在质粒是溶液了，即使加到柱子里，离心，应该质粒跟ENDO-FREE SOLUTION 会一起下来吧（去内毒素提的）？求解释

langziforever

如果有冷冻干燥仪，可以在里面甩干一下，不用完全干燥，只需要让体积减少些，然后再调节到需要的浓度就行了，如果没有干燥仪，就用NaCl和无水乙醇用标准的步骤沉降一下，然后再溶解在较少的体积，但是沉降过程也会有损失，所以，沉降在-20C、4hrs以上，同时再溶解时尽量少溶一些！

wang3033

加质粒1/10体积的NaAC(pH5.2)，然后加等体积的异丙醇，混匀10000rpm离心5分钟，用70%酒精洗两次，加所需体积的无菌TE即可得到想要浓缩的质粒了。

huangcong1988

回复 wang3033 的帖子/ V, v, D1 x% l8 H, v' ^7 z5 n/ P

1 u; C) |* X& j8 ]' N* }7 {谢谢，我用的是去内毒素提质粒的，所以可能重新过柱可能比较保险一些，我理解的重新过柱是加乙醇，之后就转移到柱中，其余同下面的

wang3033

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1 E6 M# p1 d* X5 _, U) s4 b5 N" ^, z7 m9 b4 e. e& K
过柱损失大一点，我说的沉淀法几乎一点不损失质粒。

hygene

如果是用于细胞转染的话， 确实需要重新过柱，去内毒素的。

christophe

回复 hygene 的帖子# l( a- v1 j1 O

% c. O6 _9 g, p3 j+ @1 A4 O$ u那手工提取的质粒，不是没有过柱子去内毒素这一步吗？& S  p0 D! W0 ~- c6 H
所以乙醇沉淀浓缩的方法应该也是可以的吧

hygene

回复 christophe 的帖子6 a# v+ k6 a4 Q. `- V/ ~2 c1 u

/ o3 h  B- c8 F( T2 z* Z6 O手工提取确实没有柱子，但是这样的质粒没有去除内毒素，用于细胞转染会导致细胞大量死亡，甚至最终实验失败。( ?# {$ x4 g1 L% H* d

hygene

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' \  O8 e* e3 D5 I. I* x手工提取确实没有柱子，但是这样的质粒没有去除内毒素，用于细胞转染会导致细胞大量死亡，甚至最终实验失败。# _& K" d. M) Y; ~  ~4 [: s  c

hygene

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7 H; {7 {. O$ J手工提取确实没有柱子，但是这样的质粒没有去除内毒素，用于细胞转染会导致细胞大量死亡，甚至最终实验失败。  e- B. S" |" b8 I. `: H) a0 |