体外受精培养液的pH各是多少！

huozhicb

给位大虾，小弟摸索了好长时间的IVF但是效果一直不好，换了很多培养系统（HTF/KSOM-AA、mKSOM/KSOM、T6/CZB）都不稳定，找了一些原因，发现各方面的资料里，对于IVF过程中使用的各培养液的pH描述得很少（也许是小弟不才，没有查到一手资料），请各位专家指点。麻烦大家把自己使用过的系统和每一过程使用的培养液的pH晒一下吧，谢谢！" f5 h' r7 C- g6 J
我配好各种培养液之后，将所有培养液都调pH至7.4左右，使用前12h做成小滴，用矿物油覆盖，放入培养箱平衡。

帕帕拉

你做的什么动物？

帕帕拉

你做的什么动物？

jhu132llh

都是7.4的. w8 ~( q7 S0 Q
一直也没问题的6 \( U! o, a# ]! m& C
不知道你的怎么就效果不好) {( N1 d: Z- V! z+ A4 ^' E
考虑过培养箱的培养条件吗

POPOLD

7.2

huozhicb

回复 帕帕拉 的帖子4 i0 |' t! e8 f( H  p: J

# ~% U& ~& c4 G小鼠的谢谢支持

huozhicb

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3 ~: j% l) p+ f7 a* o# P+ }4 K2 _1 Y$ g1 L4 L+ Z* Z
谢谢您支持！我们的培养箱是新买的，买的时候校准过：37℃、5%五九高纯二氧化碳、饱和湿度。
" ?/ Q& H2 n( H9 f! B2 e; M我想问一下，你们的pH时按照《小鼠胚胎操作手册》上的方法，先充气平衡然后测pH吗？: @& O2 e8 M: L+ f$ |
我们这里没有充气的装置，所以直接用pH计调的pH。感觉靠酚红的颜色标定有迷惑性：加了BSA之后培养液的颜色都偏黄。
" u# S  t! k$ g: u8 ^- X8 k* q8 i

jhu132llh

回复 huozhicb 的帖子' X9 q7 b/ h. W" G. v

- n3 _* ~  f* j4 F3 J$ |) o先充气平衡然后测pH是要更加准确
6 a- Z$ j  A- j但是一般情况下我们也不这样做: z( b. k- J0 G* y4 D" n9 C
太麻烦了
! A2 b, ~5 j- ?' s( f7 h都是直接用pH计调的pH8 s2 b$ l% v! W; |+ O) l/ D9 [2 L
是的. ^! e" ^1 S, K( C" T% \
加了BSA之后培养液的颜色是偏黄的) J$ {1 m: ?( ^0 p
但是只要PH值对了就OK了，一般在PH校准后在培养箱中CO2对PH的影响不大的
, v0 O! ?9 s. {8 S2 M# q* N& o) C不影响细胞的正常生长的( N  X  h5 q+ j/ j3 K
只是颜色是确实有点欺骗性# ^! W. g! n( v% G& H3 b" ], m
需要及时换液

huozhicb

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' n% |! y& Z, |9 U. L. @  f: F+ ]; n7 N, p
谢谢版主我之前摸索的时候为了以防万一（因为以前实验室做这个一直效果不好），花血本买了进口的HTF和KSOM-AA（有点二，但出于无奈，实验很紧），这两天试了试，结果也不好！
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" Y; J6 ]$ o7 J+ y! J之前您说培养箱可能有影响，二氧化碳装机后已经请公司的人测过了。我又重新测了一下培养箱的温度，培养箱的最上面一层和最底下一层之间相差0.5℃左右，最高温度（长期放置的温度计的读数）能到37.5摄氏度。这个有影响吗？
, A$ T# N. g: O8 A; u' g8 e: F
3 ~* A% v9 g  H8 Y我仔细观察过受精时间结束后的情况，有不少精子围绕卵母细胞，但是能受精的却很少，是获能不好吗？我每次都是将精子稀释后，获能1小时，受精5-6小时，需要再延长吗？
3 F# e0 N- x# U  W+ w5 S8 _; r3 m$ x/ D& X/ L
麻烦版主大哥了，谢谢！

huozhicb

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谢谢版主我之前摸索的时候为了以防万一（因为以前实验室做这个一直效果不好），花血本买了进口的HTF和KSOM-AA（有点二，但出于无奈，实验很紧），这两天试了试，结果也不好！
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' Y( b9 U: a, ]' J之前您说培养箱可能有影响，二氧化碳装机后已经请公司的人测过了。我又重新测了一下培养箱的温度，培养箱的最上面一层和最底下一层之间相差0.5℃左右，最高温度（长期放置的温度计的读数）能到37.5摄氏度。这个有影响吗？/ j: X( L; d% K6 b

& a; O7 n3 ^, v; c我仔细观察过受精时间结束后的情况，有不少精子围绕卵母细胞，但是能受精的却很少，是获能不好吗？我每次都是将精子稀释后，获能1小时，受精5-6小时，需要再延长吗？# Y+ a& P2 w4 z. S
7 U7 T6 X* t; \1 b
麻烦版主大哥了，谢谢！