铺板时如何才能把细胞铺均匀？？

仁心仁术

[img][/img]小弟在用肝癌细胞铺12、24孔板时，总是铺不均匀。先把细胞悬液种板、再加培养基、经十字摇匀4-5遍、显微镜下观察细胞已散均匀、放入培养箱时再十字摇匀1-2次，可是第2天发现还是没铺匀，中央一大坨（照片右上角），周边散在分布。求教各位老师，有何良策赐教？？+ u1 T3 Y) Q4 {% [

receiver1

12、24或48孔板，由于体积小，液体移动空间有限，用十字摇法不容易摇匀。你可以在把细胞加上后，用蓝枪头把整个的细胞和培养基吸上来再吹下去，反正里面培养基也不多。只要不快速吹打，不会对细胞造成伤害，就能混匀。

huoyan2006

铺板均匀的前提是铺前细胞悬液是均匀的，不然后面怎么摇都不会均匀的。- J5 e) `! Y0 |  @2 I
楼主可以用大一点的安瓿瓶，将细胞在里面反复吹打混匀，一边铺板一边混匀，动作要迅速，板铺好后贴着桌面十字摇匀就可以了。

zdgrp

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$ C( I6 V% Z) z9 N1 i9 ]
( l2 v* }* Y; j/ }) a8 `弱弱的问，贴壁加还是直接加到培养液里？

holywater

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4 _) ]& N, w8 ^: T) H$ \3 ^我这么说吧，你那十字不是标准十字，是做了些轻微的圆周运动，结果中间有了漩涡。然后就是那样子了4 \" ]6 j9 G# z3 ^0 l9 Q0 B
6 D& [$ N- B. W" d* l( z6 y, A
解决方法有一个简单的一个难的。 难的是保持良好的十字，或者干脆前后左右翻转板来代替你手划十字
; n& S' \+ w7 w' M                                简单的是细胞悬液先和新鲜培养基混匀再去种版，那么这种问题很好解决
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* w9 d# g" C- C7 J4 v) r6 |4 W                             另外，根据我的经验，6孔板是最好的，可以十字混，大于这个就非常容易中心旁边不一了，而小于这个没法用手晃混匀嘛
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                 最好还是先混再种版，问题全解决了% K6 @( {! M# t

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7 H  L( n) Y2 l* P9 I! X+ {, y求威望

lingchen04

十字揺匀可行，但左右和前后摇匀之间要停一下，等培养基静止一下，否则会容易形成旋涡

ying

居然没人说到经典的8字晃匀法！端着dish或者板，想象超净台上面有个“8”形（横着）的轨道（大小和速度取决于你的孔的大小）画8字画8次左右，最后在十字晃两下，无论一开始你的细胞是怎么加进去的，最后一般都是匀的 ：）

wangyashuai

回复 荷荷 的帖子) U+ D! H3 `" |. v2 K" A7 }1 O

8 T+ w9 ?9 Z% q3 b- Y# }' Z! |我今天试了一下，先加入0.9ml培养基，再加入0.1ml细胞悬液，加完在镜下看就是中间多，越摇越多。之后我又把细胞和培养基混匀后，沿边缘转着圈加入孔中，看起来比以前好多了，就看明天细胞贴壁后结果如何了。

细胞海洋

回复 wangyashuai 的帖子+ [$ g( ?) G& Q# R0 B

% E: `/ _$ k% W5 {4 G7 m* |4 S3 I* i建议你发新帖提问

荷荷

建议先加适量培养液，再加细胞悬液，之后轻轻的慢慢的贴紧操作台面左右、前后摇动，注意动作一定要轻、慢，否则容易形成涡旋，让细胞聚集在中间，之后可以在显微镜下稍微观察一下。另外最好放在培养箱的中间部分。