铺板时如何才能把细胞铺均匀？？

仁心仁术

[img][/img]小弟在用肝癌细胞铺12、24孔板时，总是铺不均匀。先把细胞悬液种板、再加培养基、经十字摇匀4-5遍、显微镜下观察细胞已散均匀、放入培养箱时再十字摇匀1-2次，可是第2天发现还是没铺匀，中央一大坨（照片右上角），周边散在分布。求教各位老师，有何良策赐教？？) @* n- Q4 ]5 y: \- v: G) \

dilal

建议楼主先加培养基，再接种细胞。摇晃时不要产生涡旋，这样细胞会集中到中间，另外放到孵箱中时最好放在中间比较平的地方。如果不行可以铺明胶试试。

angelyannan

估计是因为十字形摇匀使得细胞聚集在中央，你可以只左右摇匀或者前后摇匀试试，还有就是细胞接种前一定要混匀了，将培养板转到培养箱的过程中尽量保持平衡，不要倾斜。一点建议，你可以试试。

yangpan521

我与你有同感，我是在6cm皿内混不匀293T细胞，细胞混不匀的话包毒效果就很差，折腾了快一个月了，还是没什么进展，期间导师亲自做给我看，可是一经我手就是混不匀，我也是十字摇，求高手指点

tangyvhuang

中间一大坨的话，肯定是摇晃的时候产生漩涡了，我一般是先加好培养液，把培养液先摇晃，使整个皿底都是浸润到液体，再加入细胞悬液，前后晃五次，左右晃五次。然后放到培养箱里面。1 ~' F3 [8 `/ t$ R1 M
如果细胞都集中到一个方向密集的话可以考虑一下是不是培养箱不平，看看隔板是不是平的，看看中间是不是沉了

wang3033

十字摇匀没错，不过要贴桌面摇，不能在空中十字摇匀

dahui

培养箱不平，或者培养箱里的托架不平，但是24孔板是平的，楼主说的是中间一大坨，而如果是因为设备的不平的话，不会出现中间一大坨呀，只能是边上有月牙形的细胞堆积。% b" {7 e) q0 J
铺板计数，大家多推荐的十字摇匀，也是公认的，但是您首先得保证细胞悬液是均匀的，我怀疑是楼主过分依赖也强调十字摇匀了，以至于到了自己手里，就拼命的让24孔板在自己手上做“十字运动”了，所以它的反面效果就出来了，中间一大坨，您可以参考楼上的胞友说的，左右5次、上下5次。- \+ m& U6 h8 R) G3 P9 Y1 [
祝您好运。

future007

给你个绝招，我铺96孔板都没问题的方法，在50ml离心管中把细胞混匀，用一毫升枪边在培养孔边缘转动边加液体，争取墙头在孔边绕两圈把液体加完，要匀速加，不用晃，直接培养就行，保你没问题。

zzc2211

6孔板混匀比较简单，12、24、48孔板混匀不容易，溶液少，dish周围因表面张力液体较多，细胞也会多。楼主都集中在中央，就是摇匀时涡漩到中央了。我的做法和8楼的一样，建议楼主试一试。

zzc2211

6孔板混匀比较简单，12、24、48孔板混匀不容易，溶液少，dish周围因表面张力液体较多，细胞也会多。楼主都集中在中央，就是摇匀时涡漩到中央了。我的做法和8楼的一样，建议楼主试一试。