ips全军覆没，我该怎么办？

rongrong

大家好，我是一个IPS的培养新手，我4月份冻存了一支ips，冻存液干细胞的全培养基+FBS+DMSO=6:3:1，复苏时铺好饲养层，将融化的IPS用全培养基洗了两遍，每次离心800转，5分钟，然后用新鲜培养基重新悬浮细胞种到T25的瓶子里，但是第二天发现好多好多都漂了，没飘的居然都是单个细胞，我都快被它整的窒息了，大家看看我哪里出问题啦？这是为什么呢？现在就是叫天天不应叫地地不灵啊，老板明天有要批评了，唉！干细胞太折磨人了

rongrong

回复 oucflora 的帖子
9 L2 U# O; _, j% w/ I7 J- ]# f! r: ^* f& g+ x
我冻存时是采用裹很多脱脂棉，然后放在泡沫盒中，直接冻到-80，好像两天吧，然后转到液氮，但是前段时间实验室液氮出现过一次液氮特别少的情况，不知道是不是有影响；复苏时我将水浴锅开到38度，立即化，取15ml离心管加5ml培养基+冻存的细胞，800转5min，重复两次，然后重悬细胞接种到饲养层上!麻烦指点下。。。

rongrong

回复 evial 的帖子
6 l. d4 O2 B) o0 z/ W% K9 Z7 z( \& A* L9 z7 t
英文版是啥啊？我是新手，好多东西费了包包但是不能下载啊

rongrong

回复 Yedan 的帖子/ U% h8 ~9 F7 Q; m
) b4 Y! d6 F3 }* ~9 {7 }
是人的，800转看起来是全部离下来了，我听别人说他们都是静止放5分钟就好，主要我得细胞都变成单细胞了，不再像以前那样一个个克隆了，总是离心，吹打这样不会影响细胞的存活吗？再说刚复苏的细胞这样折腾能行吗？我就是想看看大家都是怎么复苏的？

rongrong

回复 oucflora 的帖子8 F, q+ ~4 z. e# y/ M3 J' t1 R  t

* T( z8 @8 I. n1 T还有那你们一般DMSO浓度到底用多大啊？

rongrong

回复 Yedan 的帖子
! ?( u& r, S8 g: H- d3 v* K( h1 C, A- z% r8 r4 @$ v9 k% T% R  w
:'(我是用胶原酶消化的，然后复苏时要洗几遍，不断吹洗，离心，反正就成那了，我也不知道，没有吹很多次的

rongrong

回复 张也行 的帖子
/ J% q9 w  |: |
1 W. @2 ~7 f' h8 n  @/ Q: Q恩，算是几个细胞的小集落，但是边缘没有那么明显的界限，估计都不行了，我现在想起要养干细胞手都抖，不知道怎么来呵护它，他就会好好的。。。唉1

rongrong

回复 张也行 的帖子' k" T0 Z: Y! M) @- V. f

" x/ }" z, f6 `! g' P恩，好的，谢谢鼓励啊，继续前行再接再厉