ips诱导求助

ada800515

最近一直在做ips诱导，都将近一年了，一直没有结果，非常着急，能不能有明白人指点一下啊？我用逆转录病毒，感觉病毒包装还可以，但就是没有结果。不知道还没有别的影响因素啊

sunny2829

具体过程不妨讲一讲，比如哪4F，包装细胞是什么，靶细胞是什么等等~~~
) p! i; g, n2 Y: \' U8 x最好有图片看看~~~# `+ C2 ^) E. R/ k9 y, `
不然不知道从何说起~~~

细胞海洋

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& j" w9 ]+ W" V7 P: h8 i+ V: ?4 ]2 w/ W4 y) G$ F% ^" |. a9 T
你的问题说的并不详细 请说明你的实验步骤

juan880929

首先你是做的什么物种的ips？如果是小鼠的，直接用platE细胞包装就可以了& H) ^! F8 f3 ], N
首先要先证明一下包装出来的病毒的滴度，和感染的有效性，可以用携带EGFP基因的病毒感染细胞，感染48H后观察GFP阳性的细胞比率，如果比率达到80%以上，就可以用四因子直接感染细胞了。: C2 J7 d" c5 {* l) @  K( X
其次要确定大提质粒的纯度，如果大提质粒不纯，也会影响包装出来的病毒的效果。  _; _1 Q' I1 K2 C1 [  q# P+ p
如果是小鼠的ips，用KOSR培养基克隆形成的效率会比较高。

遗云射月

病毒滴度怎么测？如果载体上不带绿色荧光蛋白怎么办

lerenina

我也是这个问题，我拿到的一套pMXS的质粒都不带GFP或者RFP什么的，怎么看转染效率及对靶细胞的感染效率呢？

ada800515

不知道lerenina的质粒是哪种啊？我的质粒包装293t感觉效率还可以，其中一个myc的质粒包装后特别亮，其余三个包装后就不是很亮了，但用四个质粒共同感染细胞后，效率就很低并且亮度也变暗了，不知道亮度变暗对诱导是不是有影响啊？我一直没诱导成功。

ada800515

包装后不是很亮的293t细胞1 ~" s1 d8 N# o. P/ a+ a
包装后很亮的293t细胞，想知道上面两个照片的包装效率可以吗？四种质粒中三种是第一个的照片，只有一种是第二个照片那样的效率，四种质粒共转染后亮度就变暗。4 x0 ~: p5 m; V3 ]* g

yangel

lerenina 发表于 2011-9-13 11:22
) U/ A( l5 t: t3 A( P* d, ?我也是这个问题，我拿到的一套pMXS的质粒都不带GFP或者RFP什么的，怎么看转染效率及对靶细胞的感染效率呢？

: @0 [" Z# K2 O% S( U
免疫荧光染色确认一下感染效率吧！

yangel

ada800515 发表于 2011-9-13 14:46
! L* Q( E; m3 H$ C7 v. H! X0 z包装后不是很亮的293t细胞- g& ~9 Z  q! Q8 ~1 B
包装后很亮的293t细胞，想知道上面两个照片的包装效率可以吗？四种质粒中三种是 ...

% x8 u$ G. \( d# Z$ Z+ [下面这个也菜just so so吧，包装效果一般的话，建议浓缩病毒来做。