请高人指教 流式细胞术 鉴定肿瘤干细胞纯度.. 阳性率太高是哪里出了问题？

figo1115

我用无血清培养法培养出了肿瘤细胞球   想看看里面所含的干细胞含量9 B/ y2 [2 H$ R- k! o; x, m

6 ]* _* Y  x; C3 c( A5 z+ w. C用BD公司的   anti-CD44-PE  和  anti EpCAM-FITC 抗体标记  结果两种抗体都标记上的含量达到 70%左右， 光这样还挺好
  I1 E& ~4 y# ]; a% R# y
7 k3 q. Y: C! f! w, {, f但结果是阴性对照组双染的细胞含量也达到了60%    不知道是出现了什么问题。
3 S* @: v9 Q8 P0 L$ H& O5 ^- z! A7 P, O* |8 r% e+ @  c) ~
请大家指教~   操作技术 跟很多人问过都没有问题啊..  是抗体加多了？  还是细胞的问题？  还是一些其它问题  希望大家能多给宝贵的意见  谢谢

tjbone

应该是是抗体加多了？可以降低抗体的浓度！！！

leisong12

回复 figo1115 的帖子  u8 q9 V. I, e" r# `0 v3 i

3 a* J& z$ |' U1 h; A8 Y) ~; B7 v请问你的阴性对照组是如何设置的，相对于肿瘤细胞球哪种细胞算是阴性对照组？

figo1115

回复 tjbone 的帖子4 t8 _6 ~$ P# `. ]" s
! k: L( c+ n; K% k" Q5 y
恩  下次打算试一试呢  但我是根据他们抗体建议的浓度做的...    还有可能有什么问题呢？

figo1115

回复 leisong12 的帖子
- p7 G8 D' |! B3 F2 o( J+ \0 i& h+ y  o% v# {# }
就是你提出来肿瘤细胞球的原来的肿瘤细胞或者肿瘤细胞系啊~

Tonypan

阴性对照是表达的阴性对照还是抗体同型对照或空白对照。
* S! u1 i+ a' _' ~最好能让大家看到图，和你的试验设置。否则很难判断

艾玛

回复 figo1115 的帖子
1 b2 d; k8 U% I" ^. i, R
5 d! D$ E- M' r; e+ x% q; }求流式细胞技术鉴定肿瘤干细胞纯度的操作方法，谢谢, Z# B6 }8 I/ R* j0 o) u

笨笨的图图

首先用BD公司抗体不一定好，如果是BDPMG，减量做的时候，同型最好试一下浓度。如果你的阴性对照是用得同型，需要看看是不是说明书中指定的同型对照抗体。如果实在不行就直接用纯细胞做空白对照。" M- R$ i, x  j7 B
还有就是你选标记的表达量是不是没有那么高？

hub12333

你用的什么细胞系，有的细胞系CD44阳性比例本来就较高

conanthird

你没有Fc block吧，估计是非特异结合。