请高人指教 流式细胞术 鉴定肿瘤干细胞纯度.. 阳性率太高是哪里出了问题？

figo1115

我用无血清培养法培养出了肿瘤细胞球   想看看里面所含的干细胞含量
. V5 C( g/ K( c5 H8 a, O: d( a) a9 Q' m
用BD公司的   anti-CD44-PE  和  anti EpCAM-FITC 抗体标记  结果两种抗体都标记上的含量达到 70%左右， 光这样还挺好
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但结果是阴性对照组双染的细胞含量也达到了60%    不知道是出现了什么问题。
1 y* X# X) _$ B9 c. [3 A1 b* Z  \
请大家指教~   操作技术 跟很多人问过都没有问题啊..  是抗体加多了？  还是细胞的问题？  还是一些其它问题  希望大家能多给宝贵的意见  谢谢

tjbone

应该是是抗体加多了？可以降低抗体的浓度！！！

leisong12

回复 figo1115 的帖子2 Q& A8 A& ^/ P: J1 O9 I( H5 \7 g( N* v

( p' \1 _0 [# `" I5 F请问你的阴性对照组是如何设置的，相对于肿瘤细胞球哪种细胞算是阴性对照组？

figo1115

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& G; n; s: A, o
% {/ U0 E. g& z/ Q7 `! F3 E恩  下次打算试一试呢  但我是根据他们抗体建议的浓度做的...    还有可能有什么问题呢？

figo1115

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4 p  C. R/ k/ F  r
2 K6 j/ M8 P9 d就是你提出来肿瘤细胞球的原来的肿瘤细胞或者肿瘤细胞系啊~

Tonypan

阴性对照是表达的阴性对照还是抗体同型对照或空白对照。0 p( {6 Y7 J% G, ~1 k
最好能让大家看到图，和你的试验设置。否则很难判断

艾玛

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& ]; V  S1 N: b+ T0 K; A7 K
) Q5 h# h' R, E5 O6 ~' N求流式细胞技术鉴定肿瘤干细胞纯度的操作方法，谢谢3 h7 c- u! e, W8 X& g) j

笨笨的图图

首先用BD公司抗体不一定好，如果是BDPMG，减量做的时候，同型最好试一下浓度。如果你的阴性对照是用得同型，需要看看是不是说明书中指定的同型对照抗体。如果实在不行就直接用纯细胞做空白对照。
% N" F& X6 \5 Y  a' ~还有就是你选标记的表达量是不是没有那么高？

hub12333

你用的什么细胞系，有的细胞系CD44阳性比例本来就较高

conanthird

你没有Fc block吧，估计是非特异结合。