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小鼠脂肪干细胞纯度问题~ [复制链接]

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楼主
发表于 2011-10-12 11:06 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
经过几个小时,本人基本浏览所有人的帖子,关于脂肪干细胞原代分离培养的方法基本都一样,只是个别出现了培养过程中细胞状态的差异,这些问题似乎都已经随着经验的提高一一解决了。可是,我还是想问个大家似乎没有提到的问题:) y& d9 |! K2 @7 R$ a/ h8 ]
1.原代分离出来的贴壁细胞中,都包括什么细胞?干细胞到底含量多少?随着代数的增加,干细胞纯度有没有改变?改变有多少?有没有做过流式的数据?& s- s1 h3 A" B) V( A2 D
如果这些经验数值我们都不知道,叫它干细胞,有点牵强吧?至少纯度不够。
/ I. s6 K) |: F" v. `% @" d! k+ y6 S. [# R4 s
2.是不是向别的特定细胞分化前,必须经过流式,尤其是要向功能细胞分化而且用到临床上,是不是细胞很纯以后才能诱导?
" A9 r4 e$ e9 U# P  当然,如果只是为了向别的细胞分化来鉴定其多能性,本人认为不过流式也可以。8 T- C  b4 P$ h" `0 W8 u
  H# z1 J" B: Z
3、脂肪干细胞向特定细胞分化前,对其Marker又没有统一标准,大家该如何选择?
, D! c9 z2 j8 i. ^- G
) v* C  n; f: P% Y  i7 I' e3 s4 X2 @  g- h$ x8 R( ~, E& w% }
请有经验的研究员介绍一下吧,很疑惑也很期待!
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沙发
发表于 2011-10-12 12:57 |只看该作者
我查了下文献,从脂肪组织中原代分离出来的干细胞成分中含有成熟脂肪细胞,前脂肪细胞,成纤维细胞,血管平滑肌细胞,内皮细胞,固有的单核和巨噬细胞。还有研究表明还含有淋巴细胞。
6 w1 X' Y  o$ |* o具体的你可以参考:Chronic inflammation in fat plays a crucial role in the development of obesity-related insulin resistance.    2 g$ D' }, a5 G7 m1 M
Obesity is associated with macrophage accumulation in adipose tissue.
5 Z7 ]& k+ M) y4 I. Q还有Adipose tissues as an ancestral immune organ: site-specific change in obesity.
" k7 n$ k0 ^' Z( U* H文献 这几篇是网页形式的我没下下来,楼主自己去找的看吧。' E# {) B# Q* c" E3 g- F, i
我开始做脂肪干细胞的时候也有同样的疑问,没有足够的纯度怎么能达到好的疗效呢。现在做干细胞美容的越来越多,虽然患者注射了细胞,但细胞的成分那些医疗机构自己都说不清楚,无非是坑害消费者。做科研就要像楼主一样有颗严谨的心啊~
* a4 e7 H. F0 [% j2 _
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藤椅
发表于 2011-10-12 13:03 |只看该作者
置于marker 有文献说向脂肪细胞分化后CD105表达会降低。
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板凳
发表于 2011-10-13 04:07 |只看该作者
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谢谢以上两位研究员,希望经验更丰富的研究员给更多的支持!

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专家 优秀会员 金话筒

报纸
发表于 2011-10-13 13:34 |只看该作者
间充质干细胞纯化有几种模式。
4 R! ?! B; ^" {: z5 ^1. 传代培养
3 J8 J9 a7 I- d& \: ?+ ^2.流式分选
* _" {/ p) O5 ~% O9 y' U3.磁珠分选。; D1 K, S: ?& F) |$ P# l
常规分离方法得到的间充质干细胞纯度较低,经以上方法纯化后,可以使纯度达到90%以上。8 R( @# b& q. w
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积极份子

地板
发表于 2011-10-26 08:24 |只看该作者
anti 发表于 2011-10-12 13:03 0 j. U. m- w' P  B! {) u. C9 D
置于marker 有文献说向脂肪细胞分化后CD105表达会降低。
8 N. Q( }1 b" `8 y+ q: l
的确是传代后CD105表达降低了0 Z4 O1 X( F, f4 R- @. `8 z
文献上有提到这点
$ `+ ~4 C9 `5 I. d( p我自己做的也发现这个问题了
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发表于 2011-11-11 01:54 |只看该作者
ADSC尚未发现特异的marker, 因此目前并无法纯化为单一细胞系
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优秀版主 金话筒 优秀会员

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发表于 2011-11-13 00:31 |只看该作者
1、原代分离出贴壁细胞的种类,与你的培养体系和分离体系有着重要的关系,曾经尝试过ES培养基培养,杂细胞疯长最终淹没干细胞,分离程序不完善,也会引入各种和更多的杂细胞。目前常规的培养体系中,原代贴壁细胞主要有内皮细胞(来自于血管,原代剔除血管和后期传代操作可去之)、造血干细胞(来自于血液,调整首次换液时间可去之)、脂肪细胞(洗涤不充分或洗涤方法错误引入,充分洗涤,洗液从表面吸弃,三次洗涤可去之)等;随着代数的增加,纯度是否有改变得看你的传代方法了,前三代传代最重要,得利用杂细胞与干细胞消化所需的时间上的差异来逐代纯化,三代以后纯度就相当高了。
* u5 |; L( n! t2 U/ `) D2、是否必须过流式,你发文章时编辑可能会问你,若你没做可能不好解释;用于临床最好还是严格点,因为对于种子细胞的必须得有清晰的背景,而且用于临床的细胞,对其纯度要求是非常高的,这里的纯度不仅只种子细胞的纯度,还有诱导后目的细胞的纯度,没诱导成功的干细胞与诱导后的细胞混杂注入治疗,很可能致瘤,这也是ES细胞用于临床治疗的瓶颈所在,不过最近报道的PHA纯化可以很好的减弱这种影响。
; p) x' g3 R8 r, L6 u! Q  对于你说的“如果只是为了向别的细胞分化来鉴定其多能性,本人认为不过流式也可以”,个人认为不合理,原代分离的脂肪干细胞中有很多的杂细胞,也可能有造血干细胞,你没有用流式鉴定细胞纯度,没有剔除杂细胞的影响,诱导后的细胞你能说一定就是由脂肪干细胞诱导而来的么?这就造成了一定的不严谨性。
0 v" U' I8 h* C/ ~  e3 Q( ]. [9 D1 i: g) W, |
3、脂肪干细胞没有特定的Marker,一直是其鉴定的掣肘,所以目前的同一的鉴定方法是三个方面相互辅佐共鉴之,我想你也应该看到过相关的资料:即贴壁生长、强自我更新能力,间充质来源干细胞Maker高阳性表达,三系分化,这是目前算是最严谨的鉴定方法了。, Z+ y) \; [3 }5 J6 a* u1 [6 H
   个人拙见,希望对你有帮助……0 O/ T9 z$ k# G  O6 I6 Y) z# h
! @0 |% Y; g! Z4 c0 t) ]
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发表于 2011-11-13 23:48 |只看该作者
zerollx 发表于 2011-11-13 00:31
! N& V: E9 [( \4 {; @' r& y* Z1、原代分离出贴壁细胞的种类,与你的培养体系和分离体系有着重要的关系,曾经尝试过ES培养基培养,杂细胞疯 ...
, f+ W4 W: i" @! ^; u
受教了,很详细。
, X( x1 R# I+ T) K补充一点:关于脂肪干细胞鉴定,多向分化能力可以加以证明,目前主要有两种办法:1,体外诱导向成骨、成脂、成软骨等各个方向分化,通过染色观察其表达相应目标细胞蛋白,进而证明诱导分化能力。2,将干细胞复合支架材料植入裸鼠体内,可以成瘤,含有多种组织类型,也可以证明脂肪组织来源的细胞中含有多能细胞。
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发表于 2012-4-6 19:12 |只看该作者
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" h- o' N7 T3 J& W& z% B2 ?7 ^  p, ^7 e2 `/ F& T/ M3 }9 g4 Z3 y% V
今天才看到这么好的回复,受用了,谢谢
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