MEF feeder 的问题 γ or MMC

白巧克力

  大家做feeder的MEF是用γ射线照射还是用丝裂酶 C啊？1 }1 w) _# N, n) U! X2 ~+ o
丝裂酶C对细胞的毒性不小，但是国外文献大部分都是用丝裂酶C，不用γ射线，国内的话，是不是有条件就用射线呢？
# `# K3 Z1 j/ x' K  T 总感觉吧MEF拿到医院，感觉再包好也不放心。。。 。。。/ e- ^& n2 U9 I% @7 p2 t3 G0 C
大家什么意见啊？

huangcong1988

自己用丝裂酶C处理吧，操作很简单的，用射线处理，度很难掌握

majing217

我正常做feeder就用丝链霉素C

chutu

有γ射线装置的话，还是辐照处理省事。现在还有代替γ射线的x-射线辐照仪，更好用

guo6259

用丝裂酶素C吧，经济有实惠。" |9 n0 o. E% t
用医院买的用于抗肿瘤的就行的。
- E* X8 `  G. {; S6 R- g效果也很好的。用海正的就不错。

zhusealin

有条件还是用辐照比较好。一次可以处理一批冻存，也不用担心有残留毒物。我们就是把需要辐照的MEF消化下来都装在一个50ml离心管里，拿去辐照。如果路途比较远，就放4度运输。一个50ml离心管装10的9次方MEF，辐照完了就冻存，用的时候再复苏。

白巧克力

回复 zhusealin 的帖子3 W" @- @5 w& Y+ j, A

6 l* p/ D& x$ [$ p, R7 R) S% X1 h0 L谢谢！！
/ Z0 d9 Z2 N' `: g7 T$ U9 e问几个问题：
  e& W) M6 e: p( A- z1. MEF冻存的密度是多少？p3代的细胞应该不少，收集起来去照，照完拿回来要计数分装冻存的吧？具体是多少呢？
2 W, F0 v, g1 e# E( ~! r1 y& e) U2. MEF做feeder做人的ips铺板密度是多少？
" b% j+ Z: L4 G4 Y( h. d& l6 f谢谢！

白巧克力

回复 guo6259 的帖子
  Y8 r' G, ?3 Q3 v! O
. E" o5 N6 |" H" W0 n+ b第一天铺feeder，让其贴壁，第二天加丝裂酶C，反应多久？要用PBS还是DPBS洗，洗2遍就可以加入MEF培养基放培养箱不用管了吧？

刘森泉

我们实验室一直用丝裂酶C处理的，感觉还好啊，就是注意MEF状态要好，可以让你作feeder一段时间的，要是状态不好那对你的目的细胞效果就很差了。

ligangtiancai

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4 O4 _' D& x/ t+ B) N* g* g1.冻存密度取决于后面iPS铺板的密度，例如如果一直是T25Flask 进行1:6传代的话，可以一支冻300万（3X10的6次方），然后每次复苏2支就行，冻存前计数: H5 p7 j; H! h, j  v
2. 推荐密度为75万/cm2，考虑到复苏率的问题，推荐铺85-90万/cm2