MEF feeder 的问题 γ or MMC

白巧克力

  大家做feeder的MEF是用γ射线照射还是用丝裂酶 C啊？
+ F1 W, M8 l- _* t, d8 i4 { 丝裂酶C对细胞的毒性不小，但是国外文献大部分都是用丝裂酶C，不用γ射线，国内的话，是不是有条件就用射线呢？
* s3 D# v2 k3 T# T" [4 n 总感觉吧MEF拿到医院，感觉再包好也不放心。。。 。。。; [# I4 x& S' S4 r8 }$ ^% h" z& c
大家什么意见啊？

huangcong1988

自己用丝裂酶C处理吧，操作很简单的，用射线处理，度很难掌握

majing217

我正常做feeder就用丝链霉素C

chutu

有γ射线装置的话，还是辐照处理省事。现在还有代替γ射线的x-射线辐照仪，更好用

guo6259

用丝裂酶素C吧，经济有实惠。) X) O. F9 f/ }% o2 q! w& M
用医院买的用于抗肿瘤的就行的。
# U/ j+ B& _  V0 `效果也很好的。用海正的就不错。

zhusealin

有条件还是用辐照比较好。一次可以处理一批冻存，也不用担心有残留毒物。我们就是把需要辐照的MEF消化下来都装在一个50ml离心管里，拿去辐照。如果路途比较远，就放4度运输。一个50ml离心管装10的9次方MEF，辐照完了就冻存，用的时候再复苏。

白巧克力

回复 zhusealin 的帖子6 L, n$ c  b: w' m3 U" W2 v

$ l% \4 C. ]+ z1 a7 n* ~谢谢！！
, W$ U, Y/ Z# p  T; S; H/ L# o$ G问几个问题：
+ C; N* S1 q$ j  L9 E1 z1. MEF冻存的密度是多少？p3代的细胞应该不少，收集起来去照，照完拿回来要计数分装冻存的吧？具体是多少呢？
6 K! W: s+ r$ c) U# \* y2. MEF做feeder做人的ips铺板密度是多少？
1 I" O3 K+ N- X) g# X! {0 f谢谢！

白巧克力

回复 guo6259 的帖子$ q+ d- h# T9 Z1 ^7 U9 j4 b

; f9 t' u' G! N9 Q第一天铺feeder，让其贴壁，第二天加丝裂酶C，反应多久？要用PBS还是DPBS洗，洗2遍就可以加入MEF培养基放培养箱不用管了吧？

刘森泉

我们实验室一直用丝裂酶C处理的，感觉还好啊，就是注意MEF状态要好，可以让你作feeder一段时间的，要是状态不好那对你的目的细胞效果就很差了。

ligangtiancai

回复 白巧克力 的帖子8 ^  e+ V! w* |, h# u
& [( t  p. w- R. v" f- @! \
1.冻存密度取决于后面iPS铺板的密度，例如如果一直是T25Flask 进行1:6传代的话，可以一支冻300万（3X10的6次方），然后每次复苏2支就行，冻存前计数1 d/ T/ s- Y% C! F. z; o+ Q
2. 推荐密度为75万/cm2，考虑到复苏率的问题，推荐铺85-90万/cm2