求助如何浓缩细胞培养基，分离提取蛋白？

get0715

细胞培养基中含有较多细胞分泌的因子，如何总这些废弃的培养基中将这些有用的蛋白提取出来？首先解决总蛋白的提取就可以了，去除一些杂质和酚红。我对提蛋白知之甚少，希望得到大家的帮助。

john7812x

3 q& Z" d5 t* I; v9 J# s1 D& B/ B

, Z0 n! P6 F: ]+ R$ n0 `因为在培养细胞时一般是使用FBS（胎牛血清），由于血清中含有很多蛋白，所以很难把细胞分泌的蛋白分离出来，但是鉴定细胞分泌蛋白还是可以的。或者在培养细胞时尽量少用FBS，然后用层析等方法分离蛋白质，这方面我不晓得了。
; @! q+ J; z, c沉淀总蛋白的方法，我用过终浓度10%TCA，然后用特异血清做Western Blotting，来鉴定总蛋白中是否有细胞分泌的蛋白质。0 n: A, U4 Q  N; [6 e, m

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zxcv12345

可考虑用浓缩管理新浓缩

get0715

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7 Y! q4 X8 x6 C+ k3 N
# c, h- l3 F" F9 _' ?: m请问什么是浓缩管理新？实在是对这方面不了解，见笑，呵呵！

zxcv12345

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不好意思，浓缩管

get0715

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0 d8 W! ]8 ?6 ?) R4 Z( ~' P7 g) n, S/ n7 c% |# [* D
我用的是无血清的培养基，所以不存在血清的干扰。

get0715

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1 P; n" Y- D7 }0 Y8 ?* Q
9 q: O4 F7 h) r感谢您的建议，不过需要浓缩的样品量实在太大了，不适用这种浓缩管。

zhusealin

小量的可以用超滤离心管，浓缩细胞因子，要选小一点的分子量的超滤膜，比如3KD的，杂质分子量应该更小，就在超滤的过程中被去除了。大量液体浓缩可以用浓缩仪，一次可以处理几百毫升

get0715

回复 zhusealin 的帖子. C5 d/ v3 Q1 B: T3 P6 C& I
. N1 i* }, ]/ z( L8 k
好的，谢谢您的帮助

绿雪

不知冷冻干燥是否适合？