求助如何浓缩细胞培养基，分离提取蛋白？

get0715

细胞培养基中含有较多细胞分泌的因子，如何总这些废弃的培养基中将这些有用的蛋白提取出来？首先解决总蛋白的提取就可以了，去除一些杂质和酚红。我对提蛋白知之甚少，希望得到大家的帮助。

john7812x

7 h6 Q) `1 q; }# o* j6 _

7 c! B1 d, t- E+ P: _+ ^3 u, \因为在培养细胞时一般是使用FBS（胎牛血清），由于血清中含有很多蛋白，所以很难把细胞分泌的蛋白分离出来，但是鉴定细胞分泌蛋白还是可以的。或者在培养细胞时尽量少用FBS，然后用层析等方法分离蛋白质，这方面我不晓得了。
* O1 {& B% {- H5 P6 N沉淀总蛋白的方法，我用过终浓度10%TCA，然后用特异血清做Western Blotting，来鉴定总蛋白中是否有细胞分泌的蛋白质。- P; N8 E  y/ o2 T& J
3 ?: u. _+ O* }

zxcv12345

可考虑用浓缩管理新浓缩

get0715

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& O/ m. `; w' z3 c( y+ U& n& x- y  }, _% s$ Q
请问什么是浓缩管理新？实在是对这方面不了解，见笑，呵呵！

zxcv12345

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( g) {1 z. \* l8 C% |7 ~$ m7 h& |$ q  s, d; w" Y2 R
不好意思，浓缩管

get0715

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- a+ Z0 a) Z! M- y) A+ z- L8 a  R) L( q  ^0 V2 g( |
我用的是无血清的培养基，所以不存在血清的干扰。

get0715

回复 zxcv12345 的帖子, F/ f5 `9 W5 x4 r1 R

( F6 Q8 r' p+ d0 n4 N5 e7 ]0 b1 x1 V感谢您的建议，不过需要浓缩的样品量实在太大了，不适用这种浓缩管。

zhusealin

小量的可以用超滤离心管，浓缩细胞因子，要选小一点的分子量的超滤膜，比如3KD的，杂质分子量应该更小，就在超滤的过程中被去除了。大量液体浓缩可以用浓缩仪，一次可以处理几百毫升

get0715

回复 zhusealin 的帖子5 o$ J. |/ R: b/ D$ a

+ [! ?2 t- ^0 x( l  v5 e4 R好的，谢谢您的帮助

绿雪

不知冷冻干燥是否适合？