求助如何浓缩细胞培养基，分离提取蛋白？

get0715

细胞培养基中含有较多细胞分泌的因子，如何总这些废弃的培养基中将这些有用的蛋白提取出来？首先解决总蛋白的提取就可以了，去除一些杂质和酚红。我对提蛋白知之甚少，希望得到大家的帮助。

john7812x

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+ Y! I$ x0 b! J% A# ]因为在培养细胞时一般是使用FBS（胎牛血清），由于血清中含有很多蛋白，所以很难把细胞分泌的蛋白分离出来，但是鉴定细胞分泌蛋白还是可以的。或者在培养细胞时尽量少用FBS，然后用层析等方法分离蛋白质，这方面我不晓得了。 6 s3 r! `( ?& f+ m8 S6 G9 `, x7 b
沉淀总蛋白的方法，我用过终浓度10%TCA，然后用特异血清做Western Blotting，来鉴定总蛋白中是否有细胞分泌的蛋白质。+ V$ b7 M* t( A4 z/ x' p9 A1 O0 Q
7 {2 R$ L/ H2 e5 e; u( C+ B1 w

zxcv12345

可考虑用浓缩管理新浓缩

get0715

回复 zxcv12345 的帖子5 ~) n% n0 v  |. N

* B3 e! j; p' E7 @! m/ f. ~$ |请问什么是浓缩管理新？实在是对这方面不了解，见笑，呵呵！

zxcv12345

回复 get0715 的帖子$ a2 ~) p9 c' [) S

; L; y$ h' J9 ~不好意思，浓缩管

get0715

回复 john7812x 的帖子$ J8 Q2 M" H- R7 h

2 w8 U! Z3 V! l- ?4 Q" ?$ w我用的是无血清的培养基，所以不存在血清的干扰。

get0715

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) I7 z: w9 d$ j* t" e# ?8 Q% w. V1 v  K% j8 }0 V) D: ~
感谢您的建议，不过需要浓缩的样品量实在太大了，不适用这种浓缩管。

zhusealin

小量的可以用超滤离心管，浓缩细胞因子，要选小一点的分子量的超滤膜，比如3KD的，杂质分子量应该更小，就在超滤的过程中被去除了。大量液体浓缩可以用浓缩仪，一次可以处理几百毫升

get0715

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好的，谢谢您的帮助

绿雪

不知冷冻干燥是否适合？