关于PEG8000的配制问题

john7812x

聚乙二醇(PEG)在不同的盐溶液中可以结合形成孔径不同的网状结构,重组质粒是超螺旋的双链闭合环状DNA,它们与RNA 、线状DNA等其他杂质分子在PEG中的沉降系数不同。通过高速离心，使沉降系数较高的重组质粒DNA沉淀下来，而其他杂质分子和不同构象的质粒DNA分子被网状结构阻隔，从而纯化质粒。5 ]/ }# {- H. Y4 |' ^3 \6 m3 P% w

john7812x

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2 B+ N- M. l) i! ~/ M2 ?) ^: x& s4 v& T8 e
PEG8000可以纯化RNA，如网页中所述：http://www.protocol-online.org/biology-forums/posts/16186.html
5 f* G7 G2 g: R  t% S% I. h$ [但是，我没有用过PEG8000提取RNA，我用试剂盒提取小量RNA，或用Trizol提取大量RNA。/ ]8 H7 ^0 n4 ]- K8 ]

; J1 R- D% e" m. E2 z40%（w/v）PEG8000 用去离子水配，如文件中黄色部分所示：9 q" z. g2 X( @( k. i6 q/ A3 I  y
" T! s( [: D4 v, z: g1 J
( A, P% G+ ^, E. ^: M4 h  Q
假如你打算用PEG8000 提取RNA，建议用DEFC处理过的去离子水来配制。

john7812x

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( N$ ]- u) z- k2 A
0 w( J$ W" B! q, _# z% Q  f你是不是打算浓缩Lentivirus，来提高它的滴度, 为下步感染实验做准备?! X; n8 l( C! R" p& X
还是要浓缩Lentivirus 的RNA？
9 f  w2 q& c% ^- O4 z- B1 H& Z: K4 {8 x% W
若是为了提高病毒滴度可以超速离心的方法：
& @1 y; g6 g9 a- ~, U3 w+ x% g1 G  G/ q. k) w
若是为了浓缩RNA，可以冷冻干燥，或沉淀RNA后再溶解，等等。
+ S; N, l2 z" y
5 b; c3 ~/ p! u- N补充内容 (2011-11-1 19:54):. d2 I  U( S# N
在这个超速离心的protocol 里用的是sucrose, 没有用PEG，可能和你实验室计划不同。