最近要转染乳腺上皮细胞，听说不好转，大家有没有好的建议。

军医

实验室用电转和FUGENE HD转的效率都不高，现在我想用脂质体2000和磷酸钙发转，效率不知道会不会有所提高，大家交流一下经验吧，谢谢了。

shylook

原代？

shuixiao

如果是转染原代细胞的话  还是用病毒载体的转染效率高。目前比较常用的病毒载体系统：腺病毒，慢病毒等。
1 i* v* U8 E6 i& X& ~0 u% V病毒载体的转染效率还与操作者的熟练程度、经验有关，如果实验室没有相应的转染技术的话，可以寻求一下合作，或者送到其他具有成熟技术的实验室做，当然是在经费允许的前提下。

刘森泉

原代的比较困难，可以要个或买个病毒包装系统试试，也可以先用LIP2000试试，不过估计比较难。

军医

回复 shuixiao 的帖子
6 j, s# r( A2 s% C4 Q' _
$ h8 i' R* t% C# _+ m& t) k我们转的是3代的乳腺上皮细胞，而且还是解冻的，目前我们用的比较多的是电转和FUGENE HD,效率不高

军医

回复 shylook 的帖子) _- @6 G2 N. F# `5 a7 ?( H

% f! F0 \4 @3 T! K2 X2 g/ k& \1 L4 B原代比其他代数的难转吗？

trl137

我们一般做乳腺细胞的转染，都用的是脂质体介导的转染，效率不错，你可以试试。
$ q2 A" C9 V0 i, A关于楼上的说转染原代细胞的问题，我想对转染很通的人而言，是不会用原代细胞的，因为本身原代细胞就是从组织块游离出细胞，细胞整体性状不一致，而且还有组织块在其中，所以当把一个外源基因整合到细胞中时，细胞的重编程机制会启动，这需要细胞的状态很好才可以应对这改变。! y0 Y! T( @& |9 r# c7 G* k/ a' E
但是细胞的传代次数应该控制在4代以内，以维持细胞的最佳状态。
6 o' _! J5 t' h. F8 y; j2 ]建议用lipo2000，效果很好。

军医

回复 trl137 的帖子! M) w0 X# o* \# A1 x8 F
' P* z4 P2 X  c4 Q& E5 g$ ^0 [. I
好的，谢谢，我用200试试

wagumaxida

shuixiao 发表于 2011-11-1 16:40
  d# u. v. b& R3 o1 j" b- k% i4 M如果是转染原代细胞的话  还是用病毒载体的转染效率高。目前比较常用的病毒载体系统：腺病毒，慢病毒等。
7 |7 G1 A. A. w0 l/ b& B ...

$ M4 J+ d! J( k( S9 t
没错 我用的F35型腺病毒，效果很好，另外 学长说腺相关病毒也不错 你可以试试