最近要转染乳腺上皮细胞，听说不好转，大家有没有好的建议。

军医

实验室用电转和FUGENE HD转的效率都不高，现在我想用脂质体2000和磷酸钙发转，效率不知道会不会有所提高，大家交流一下经验吧，谢谢了。

shylook

原代？

shuixiao

如果是转染原代细胞的话  还是用病毒载体的转染效率高。目前比较常用的病毒载体系统：腺病毒，慢病毒等。
7 x4 y( ]) a) ~" v( {; W病毒载体的转染效率还与操作者的熟练程度、经验有关，如果实验室没有相应的转染技术的话，可以寻求一下合作，或者送到其他具有成熟技术的实验室做，当然是在经费允许的前提下。

刘森泉

原代的比较困难，可以要个或买个病毒包装系统试试，也可以先用LIP2000试试，不过估计比较难。

军医

回复 shuixiao 的帖子9 k* i. F0 y8 N) N0 l
$ E- ~- _/ [% S2 p3 H
我们转的是3代的乳腺上皮细胞，而且还是解冻的，目前我们用的比较多的是电转和FUGENE HD,效率不高

军医

回复 shylook 的帖子
! e  |4 d" r$ o( H. h3 P6 b. n
' m9 I) l& `. |' Q  b, ^+ }! e. J原代比其他代数的难转吗？

trl137

我们一般做乳腺细胞的转染，都用的是脂质体介导的转染，效率不错，你可以试试。2 V7 l( c- e- b6 I! b% I; X" w3 m
关于楼上的说转染原代细胞的问题，我想对转染很通的人而言，是不会用原代细胞的，因为本身原代细胞就是从组织块游离出细胞，细胞整体性状不一致，而且还有组织块在其中，所以当把一个外源基因整合到细胞中时，细胞的重编程机制会启动，这需要细胞的状态很好才可以应对这改变。7 [. i3 Q8 F: r6 A+ F& f, N
但是细胞的传代次数应该控制在4代以内，以维持细胞的最佳状态。
, u2 ~( {1 H' S  G+ U建议用lipo2000，效果很好。

军医

回复 trl137 的帖子0 \; Q! I$ t5 {
: b2 [6 s% b) |, S+ \
好的，谢谢，我用200试试

wagumaxida

shuixiao 发表于 2011-11-1 16:40 9 p! L! A% g  s9 J, a
如果是转染原代细胞的话  还是用病毒载体的转染效率高。目前比较常用的病毒载体系统：腺病毒，慢病毒等。. w2 L9 [% b- m" Z& j
...

6 M2 o! [! I/ x没错 我用的F35型腺病毒，效果很好，另外 学长说腺相关病毒也不错 你可以试试