关于细胞计数的问题

meggie

最近关于细胞计数的方法，发现大家各有不同的方法，用一般的细胞计数板的话，细胞需要稀释多少倍，一滴是多少量，然后数格子的时候是怎么数，然后怎么算，大家给个完整可靠的方法，谢谢

zx314

cell line 稀释多一些，原代少一些，你可以先从10被稀释开始，若计数格中细胞数目太密，在稀释10倍，若细胞压格子只计算左上和左侧的数目（也可只计算相反的的），格中的一个细胞代表乘10000个.4格细胞数目加和除4，我一般取10微升计数。

wangzhiqi86

稀释倍数不定，稀释后一个小格子的细胞数为30-40个时，数出来的细胞数最为准确，血球计数板的放大倍数为1×104，八个小格子的细胞数数出来之后取平均值，乘以10000，再乘以稀释倍数，即为目标细胞密度。

yangwy028

脐血干细胞贴壁性很强，越稀释越不准。间充质还可以尽量稀释的，如果重叠得多了就数不清楚了

cgc123

血球计数板用盖玻片盖好后，跟你的加液量没有关系，计数区的体积都是1μm3。计数的稀释倍数要根据自己细胞的大概浓度了。

紫电苍炎

我这边计数一般不用稀释   一般都是数有核细胞 先1:1破红  然后加10ul的样  一般样品细胞数少就数全部4个大个子  10倍物镜    如果细胞量大就数几个小格子  40倍物镜   

yglky

- p4 E2 G7 M) B$ r! |

; |1 m( s% o3 |稀释倍数可以根据细胞离心收集后沉淀量多少来依据经验判断。对于比较宝贵的细胞，数量不多的情况下，其实可以将收集的用10ml以内培养基进行稀释，直接去测定，这样可以减少细胞损失，而且操作方便。

tigerfish

如果你真的要纠结的话，可以尝试做个1-100倍稀释，分10个浓度的实验，% u1 Y" f( ]& ?1 _- F7 P
数十次，画log曲线，曲线比较直的部分就是比较好的数细胞浓度了9 l- s; a. B1 F8 d1 M1 c
9 }  J6 W$ y& M  `4 b+ O& d) M/ Q
P.S.6 W% B' X, E' k) h1 [5 L3 e
如果你真的做了，希望你能把结果分享出来，呵呵

fananran2003

我们计数一般都稀释10倍，细胞悬液混匀后取10ul，然后取90ul培养液混匀，计4个大格（64个小格）后，除以4乘以10000就是所需密度了，压线的数左不数右，数上不数下，粘连到一起的记为一个，其实挺简单的，做几次就好了，主意的一小点就是，向上面加细胞悬液的量要适当，不要过多、过少，过多，玻片下液体会流动，过少，不能铺满4个大格子，

dongxin

一般细胞数在10^5-10^6之间就可以吧，所以你最好是根据镜下的细胞数来调整你的稀释倍数，, R9 P1 I! g  ~4 o4 O9 E: h5 K
细胞计数：" ^/ T) d2 e. Y0 f: x5 h9 S
       计数板的处理：用无水乙醇或95%乙醇冲洗计数板后，用干净绸布或是擦镜纸擦净，同时擦净计数板的盖玻片，把盖玻片覆在计数板上面；
! X/ H, Q& f; G) b& S4 F4 T       加细胞悬液：用无菌细口吸管吸取一滴细胞悬液（细胞悬液也可先进行稀释，在最后计算细胞数时应乘以稀释倍数），从计数板边缘缓缓滴入，使之充满计数板和盖片之间的空隙（注意不要使液体流到旁边的凹槽或是带有气泡）。
) S9 A6 p+ Y0 Z& @% y/ J. W7 U: o2 p       计数：在镜下观察计数四角大方格内的细胞数，只计数完整的细胞，若聚成团的细胞则按一个计数，此外在一个大方格内的细胞有压在线上的则计上不计下，计左不计右。3 D2 U9 X0 Q4 Y" k7 N
      计算：细胞数/mL=4个大格细胞总数/4×10000，若计数前稀释则要乘以稀释倍数。: f0 I! u1 S; ?" j1 I6 w) V9 r
供参考，祝好运！