新手ips培养18天形态请教

jane2011

本人第一次做ips诱导，在day10的时候看到有貌似克隆团的出现，但克隆团边界不清，现在已经day18天了，肉眼可见很大的细胞团，100X的显微镜视野下也看不完整个细胞团，不知道是什么，把图片发上来请教大家，谢谢！

jane2011

回复 znbr044 的帖子
& c  y2 W" w" w1 _
+ e/ \9 H" C/ e9 o; z" d可是我的所有培养基中都加的有支原体移除挤啊，不过都加的是预防剂量。

znbr044

不是克隆，可能支原体污染了

wangyimei

学习了

majing217

这个应该不是IPS,IPS是呈克隆状的，我们没有看到。

liuzhenallen

这个应该不是ips克隆，正常的ips克隆是有明显的界限的，虽然你的照片并不是很清楚，但基本可以推测这是诱导未成功的细胞生长而成 ，我在早期最ips诱导的时候也会经常碰到这种情况，建议多重复尝试几次，总会成功的

song58

回复 jefferson 的帖子  M9 t& K& c  ?
( z, k' V) L3 X, q$ Z5 c; J: x
谢谢jefferson分享你的经历！受教了！

jefferson

song58 发表于 2011-11-18 10:23
( Z: [4 K4 b# G* ]. P回复 jefferson 的帖子
, H1 ~7 e7 x: E4 c- _) ~  N  w' k# a+ ?. Q! l
厉害！敬仰！说实话，我真是佩服你的耐心和毅力！

# o* b$ F  [! ]9 j
看到这样的克隆, 我也是比较奇怪. 所以就顺带的把几个这样的克隆一直养着看会有什么样的变化, 后来因为方向不同,就没继续了. - p. R, v/ I2 t, \; V4 g
& K  e! [6 c2 M/ p: G4 n/ X3 b
对于你的问题: " X$ L. d$ ]: @/ g7 p: r
1. 我是用逆转录病毒转的四因子加GFP做的, 在这种克隆中, GFP表达非常弱, 但又不像完全诱导iPS克隆那样是完全沉默. 镜下能看到类似背景信号的荧光, 但不好下结论其完全沉默了.
0 p0 `7 {( @  u5 t  u+ _# q2. TRA-1-60以及81的染色中, 信号很弱, 但和背景比, 在普通荧光显微镜下(非Confocal), 还是比较容易观察到的, 但和ES或者完全诱导iPS那种很亮的结果比还是有很大差距. 那种完全诱导的在镜下快速的扫片就能发现, 这种不完全诱导的仔细观察才能看到. 6 G9 y9 g1 Q9 P$ ~9 _* C$ }# U
3. 这种克隆比较奇怪, 传了20多代形态上和前几代基本相同, 增殖速度和ES及iPS差不多, 基本6天传一次. 每一代中, 散了的克隆,或者说失去形态的克隆比较较高, 但大部分还是能保持克隆形态的.7 R# N& N; Y- F- T

9 B3 J! f/ Y/ g这种克隆及其不完全诱导机制很多人都在关注和研究, 因为我们的方向不是这个,所以就没做了. 希望有做这个的同学或老师能有所突破.

song58

回复 jefferson 的帖子& T; E: k  {1 \! ?( E3 _

% @, j. Y7 n8 T1 H& p厉害！敬仰！说实话，我真是佩服你的耐心和毅力！8 P( N, {- @6 D  t
20多代，100多天呀！我很好奇：
$ c" e( }2 Q9 _3 q: {1、这些克隆是转基因的吗，外源有沉默吗？
2 Z& k8 C5 M  U+ ?) L/ a3 ~3 M2、这些60&81弱阳性有多弱，和阴性对照比是怎么样？
/ f, a9 X. J5 T! [# q1 c7 W3、在这20多代中，那些克隆的形态有没有明显的变化呢？增殖情况如何？会不会养着养着就散了呢？
. I/ e; V3 {4 _  f/ B

jefferson

回复 song58 的帖子5 ?( I, u9 ~# r& n. T' ?; f( n

  q: I4 \6 ~. a5 |' r" q  p最开始是用AP染, 很多克隆会有比较弱的信号. 然后我们做了免疫荧光染色, 用TRA-1-60和TRA-1-81都染过, 有些不完全诱导的克隆也能在镜下看到很弱的阳性信号. 把这些弱阳性的克隆挑出来后, 其甚至可以连续传20多代, 仍然保持克隆形态, 只是和iPS或ES克隆不同, 这种克隆不平坦, 不够致密, 也无法形成EB. 因此我们推测其可能是比较接近iPS的不完全诱导克隆.2 Y2 @" k/ d# n4 j

9 K" T3 `# `5 L! d仅仅是我们实验中的现象, 拿来大家一起讨论/ u& I" g! J  H. ^3 w