新手ips培养18天形态请教

jane2011

本人第一次做ips诱导，在day10的时候看到有貌似克隆团的出现，但克隆团边界不清，现在已经day18天了，肉眼可见很大的细胞团，100X的显微镜视野下也看不完整个细胞团，不知道是什么，把图片发上来请教大家，谢谢！

jane2011

回复 znbr044 的帖子. G8 N5 J9 X$ _, G9 t
# S# E( d" j9 d
可是我的所有培养基中都加的有支原体移除挤啊，不过都加的是预防剂量。

znbr044

不是克隆，可能支原体污染了

wangyimei

学习了

majing217

这个应该不是IPS,IPS是呈克隆状的，我们没有看到。

liuzhenallen

这个应该不是ips克隆，正常的ips克隆是有明显的界限的，虽然你的照片并不是很清楚，但基本可以推测这是诱导未成功的细胞生长而成 ，我在早期最ips诱导的时候也会经常碰到这种情况，建议多重复尝试几次，总会成功的

song58

回复 jefferson 的帖子7 G! j4 @3 u3 P4 I2 W) W7 \

. _4 E! z* b' Q' {, ]$ {! E3 X+ W谢谢jefferson分享你的经历！受教了！

jefferson

song58 发表于 2011-11-18 10:23 0 C/ q9 q( d7 C+ I2 q2 J
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, q0 T3 J( O8 B) P; e( i, h1 s8 w7 O/ F. [$ x; s+ y
厉害！敬仰！说实话，我真是佩服你的耐心和毅力！

- H% e% L. b" t' B6 ~5 E6 ?
看到这样的克隆, 我也是比较奇怪. 所以就顺带的把几个这样的克隆一直养着看会有什么样的变化, 后来因为方向不同,就没继续了. 4 ?. S- K; I' `; a. f
  M6 E; ]$ J+ O% t5 r% J, J
对于你的问题:
# a) b. w' e5 j8 y" M; [1. 我是用逆转录病毒转的四因子加GFP做的, 在这种克隆中, GFP表达非常弱, 但又不像完全诱导iPS克隆那样是完全沉默. 镜下能看到类似背景信号的荧光, 但不好下结论其完全沉默了. $ G8 Z  N: }6 o. a7 P& M
2. TRA-1-60以及81的染色中, 信号很弱, 但和背景比, 在普通荧光显微镜下(非Confocal), 还是比较容易观察到的, 但和ES或者完全诱导iPS那种很亮的结果比还是有很大差距. 那种完全诱导的在镜下快速的扫片就能发现, 这种不完全诱导的仔细观察才能看到. 3 b- a: {1 b' ?2 l) E; D! v/ \
3. 这种克隆比较奇怪, 传了20多代形态上和前几代基本相同, 增殖速度和ES及iPS差不多, 基本6天传一次. 每一代中, 散了的克隆,或者说失去形态的克隆比较较高, 但大部分还是能保持克隆形态的.
" _. c2 M5 R; r$ Y( F) m
! l5 X6 B9 {' D' R% p这种克隆及其不完全诱导机制很多人都在关注和研究, 因为我们的方向不是这个,所以就没做了. 希望有做这个的同学或老师能有所突破.

song58

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* _( ?& J& x: q% a; C) Q
- q$ F8 f7 U; V, X厉害！敬仰！说实话，我真是佩服你的耐心和毅力！; r" H# Y+ N5 }0 a' }: I5 i7 P$ O
20多代，100多天呀！我很好奇：# z8 X2 d5 j2 J7 ?* P" h
1、这些克隆是转基因的吗，外源有沉默吗？
. U) s8 w  a4 n! n- r& x7 P5 H5 s2、这些60&81弱阳性有多弱，和阴性对照比是怎么样？$ s+ n/ l, E- f* p9 C
3、在这20多代中，那些克隆的形态有没有明显的变化呢？增殖情况如何？会不会养着养着就散了呢？
, g. V8 M; _% r) n! S

jefferson

回复 song58 的帖子5 S  e4 `7 k' j

: D/ X: M+ c  F7 F, s1 M9 @2 N最开始是用AP染, 很多克隆会有比较弱的信号. 然后我们做了免疫荧光染色, 用TRA-1-60和TRA-1-81都染过, 有些不完全诱导的克隆也能在镜下看到很弱的阳性信号. 把这些弱阳性的克隆挑出来后, 其甚至可以连续传20多代, 仍然保持克隆形态, 只是和iPS或ES克隆不同, 这种克隆不平坦, 不够致密, 也无法形成EB. 因此我们推测其可能是比较接近iPS的不完全诱导克隆.
. k4 _" T8 s7 \3 Z6 q! r1 b3 _3 ?! b
仅仅是我们实验中的现象, 拿来大家一起讨论
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