我的小鼠骨髓基质干细胞正常吗？

bathpp2007

, Q  |7 c  h- k; d2 f/ n) @3 K- w
0 ~; R6 a  v  J9 K培养小鼠BMSC多日，不太顺利3 s9 [- N7 T/ i6 Q: S9 |1 F
10月11日取4周c57小鼠三只胫股骨，冲洗物离心接种到25cm瓶中，# w' E5 U4 U( B3 N2 E
次日换液，之后隔二日换液，11月2日达90%，0.25%胰酶消化，" U3 f' t% v3 \
无EDTA（上次传代消化液含0.02%EDTA，细胞次日观察几乎全部漂浮），4 \+ R2 ~+ |; J
全培养基中和，无离心，直接1:2接种，5小时后观察已贴壁，3日中午观察贴壁良好，5 Z5 @2 T1 @: j, j% c. ^
5日观察见基本如下图示，细胞薄，亮，且数量变少约三分之一，下图为今日6日照片。5 X( t; k# p* F  J  s  f
2 K: s2 a4 g; z9 V: e0 o/ B
问题：1. 我的细胞是BMSC吗？/ m3 e" k' L' U1 E; a5 s) E
2.为什么会有一次数量的减少，是传代选择吗？（不是BMSC的细胞自然死亡）1 W! h. ^4 M' |" T3 @; @9 \: ?
3.图中蓝箭头即是BMSC吗？红箭头指的圆形的是什么东西？, [% S8 G8 L; j/ w- {: T& \

5 _% O/ G4 V+ q% K+ k) A. ?' z
0 D, c0 n# `1 M$ oP1传代后11天了，当时是1传2，共4瓶，目前生长缓慢，选较好的两瓶拍了照，请行家里手给看看4 x5 T' b2 @# p
用的是DMEM/F12，10血清，GIBCO；生长如此慢……样子如此丑619056399( k( }. L$ _* `, Q; \: s
细胞形态与上次相比有些变化，不是那么典型的“纺锤形”了
0 d9 _/ G3 H- }. S7 |: h# y* r8 w4 r5 s
7 ?1 N9 `: x9 u2 p& O5 R
2 e7 C) C4 J+ c* m' [$ G

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湖南干细胞

回复 hnsdlgl 的帖子& a6 W! F3 j! G  W' V0 V+ s2 n

& j3 E' U( k( h" p0 k; u* p这个方法值得一试，拍瓶法。学习了。

细胞海洋

回复 fluleaf 的帖子
' {( C! I: C$ O! o, {1 ~; S2 Y0 E! }! x0 I4 k; s0 ~
建议你发新帖提问$ u  f- ?7 H9 [' E4 l; B) K2 @

fluleaf

wanglijing2011 发表于 2011-11-16 16:34
9 z5 Z( {7 _) e" r/ e  ], o回复 hnsdlgl 的帖子
$ F  d" l( B9 ]1 C
  Q2 @+ U& U4 {1 ?你好，看到你回复的帖子，可能小鼠间充质干细胞做得比较多的，想跟你请教一下。

) u2 n5 Z+ U6 j' e1 ~我的小鼠骨髓MSCs的P2，P3也是这个形态，但是胰酶消化下来，铺展得很开的立刻就消化下来了，剩下的就是跟P1差不多的贴壁很牢的细胞，分开培养后，细胞形态明显不一样了，那到底哪一群是间充质？

wanglijing2011

回复 bathpp2007 的帖子
6 b  _+ n2 J  ^+ P; ^* }( D6 n; x3 H
消化时间不能太长，含有EDTA的胰酶在37度消化不要超过2分钟，否则细胞的形态变化会很大，而且消化下来的细胞也不是想要的细胞

bathpp2007

wanglijing2011 发表于 2011-11-21 17:53
( F8 N! d, ~6 {. |& }9 U( ^8 E回复 bathpp2007 的帖子/ @" H$ [" a- O0 s: a
; h, A5 h& L4 N8 i5 t1 t0 A
GIBCO的液体DMEM高糖培养基

( l; v4 k- z. v0 |7 P; t2 _多谢！

bathpp2007

" U( m8 ?+ d. p! c8 E9 N: U) {

发表于 4 小时前 |只看该作者
9 r' S: {" P( i+ D/ s; _; I: _6 \传代之后，细胞数量减少，跟消化时间有很大关系的。消化前预留终止液，消化时间3~5min，3min的时候一定要再镜下观察，如果此时还有一小部分贴壁，适当摇晃倒出，不要等到5min。？

9 O! n7 ^) V9 {: _8 G2 g, |/ G
( {5 @8 k1 w3 I: F) V+ ^& }5 N7 m
多谢！

wanglijing2011

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3 z8 m9 N8 ]+ i! v6 T
/ l9 M! o! B( [2 ~GIBCO的液体DMEM高糖培养基

Anohana

传代之后，细胞数量减少，跟消化时间有很大关系的。消化前预留终止液，消化时间3~5min，3min的时候一定要再镜下观察，如果此时还有一小部分贴壁，适当摇晃倒出，不要等到5min。

bathpp2007

) z6 w/ l. u: O( K8 O

wanglijing2011 发表于 2011-11-18 18:21
& W' ]5 s0 I1 @, L4 ^- \, r) i" F* x回复 bathpp2007 的帖子
/ ^' b# P. U- F( v. u7 d# r4 C5 H( E2 K4 {9 x
我取的原代需要5天左右传代，基本3-4天长满了，基本可以再次传代了，但是觉得细胞 ...

$ Z1 K$ @$ s% u! ?* L4 p9 m/ |( V( ~$ ~1 T  t1 ~0 M
谢谢指点。
, M' _) q9 J- h0 `请问你用的培养基是什么？ 是自配的还是预装的那种？  K; v& o* v0 M7 _5 ~