微孔板实验如何减少"边缘效应"

Temin

各位大虾，大家在用96-或/和384-微孔板做cell-based assay的时候，是否会遇到边缘效应（Edge Effect），表现出来的效应一般是边缘的一圈well读值异常，我观察和请教了周边的人，大家对这种效应的处理，一般有这几种方式：
. L1 |; z& K* N' Y2 Z6 H) f% L1、周围一圈微孔放弃不用，不种细胞，而是铺上培养基或者水；/ F! I. q2 z+ w/ X' q
2、Microplate在CO2培养箱培养时，周围用加样槽或者其他容器装水，使得microplate周围的湿度加大；" J4 A9 ^: r% C! O
3、Microplate放入培养箱之前，先在室温平衡30min或者60min，待细胞贴壁之后再将microplate放入培养箱；
! s1 K3 m+ i4 f$ W+ p# Q* ~! |% q( M4、方法2和方法3的组合。3 P8 N  k) V" f& H1 i
根据经验，不同的细胞类型，边缘效应的影响各异；对24h的实验来讲，边缘效应有些细胞可能影响极微，但是对有些细胞来讲，影响极大，甚至都不能开关培养箱门（这个见有人单独霸占一个培养箱，里面就放着他的几块96孔板）；而对72h或者更长培养时间的实验，边缘效应一般很大，经常导致周围的一圈微孔不能使用。2 H  X- V" r3 Q
那么，我一直很想知道，边缘效应的原因是什么，在上述方法2的理念里，是因为蒸发效应，导致培养基里水分减少，渗透压等理化因素变化，影响细胞的生长，所以在周围加水增加湿度，可以减少边缘效应。在上述方法3的理念里，是因为温度不平衡，骤然把微孔板从室温放入37度，那么周边孔更早升温，而这个时候细胞还在沉降，会向边缘的温度高的地方飘去降落，造成细胞密度局部加大，因为细胞的接触抑制，所以边缘的孔里面细胞生长速度减慢，所以造成边缘效应。
* @% r" @& ^8 B  G我觉得两种说法都有道理，但是，在实际当中，边缘效应还是无法避免，只能降到一个差不多可以接受的水平（相对微孔板中央位置，差异10%以内。）
/ G& R. I4 V- \. {# z所以，我想请教大家，你们是怎么操作的？对于边缘效应的理论又是什么？谢谢！& L* G3 r" @" L. a" K- h7 t/ N  c4 U
附件中是一篇关于边缘效应的文章，供大家参考。A Simple Technique for Reducing Edge Effect in Cell-Based Assays

zsm19830921

很有参考价值呀，最近试验遇到了些问题，感谢LZ

luoziwei

回复 Temin 的帖子; ]% y8 E7 r! k* j. m; K

' T9 \* V" N4 ?) c8 ~文献我倒是没有，不好意思

Temin

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( S6 E4 r- W* ~2 J' _
; F2 e$ Z2 q: `! {3 F* b8 Z谢谢你的建议，氧气的因素应该也很大，你那里有相关的文献资料吗？

luoziwei

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) n0 ]) C( M6 X) H3 A2 t5 j
" g8 z7 }2 N7 g楼主，给你补充一个，还有低氧造成的，就是氧气在孔板内分布不均。很多学生做实验都知道有这种影响存在，也知道周边一圈不种细胞，但没几个愿意查明原因，说明楼主很细心嘛。

phdyhm

在酶联免疫反应（ELISA）中常发现有“边缘效应”，即96孔板的外周孔显色较中心孔深。经研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因。孔板的聚苯乙烯本身为不良热导体，在实验室的常规ELISA测定中，将板从室温（通常在25℃左右）置于37℃温箱，板也升温时，在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。 　　
& N& I+ c0 p9 b  k  _: c解决办法是使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度（如37℃），就可以很容易地排除“边缘效应”，并且可提高测定的重复性。

bin

第一次听说边缘效应，不过以前用96孔板时周围一圈是不用的，加无菌水，好像是为了防止中心的孔板内液体蒸发。

aulenuyah

下来看看

Temin

回复 hkenb 的帖子8 Y2 x' O* T: E# k$ ]' U
0 |7 E/ o. m, X8 H2 |7 ^" f9 I, R4 Q
坐等大虾～～～

hkenb

在用EDTA传代时，也发现类似的“边缘效应”。孔边上细胞贴得很牢，但是中间基本没有贴。中间没有贴，可能是处理时间有点过的原因，但是边上贴得很牢就不好解释了。请教大虾！