临床干细胞分离方法讨论

monday2019

这些天在做干细胞分离方法的一些汇总研究，看了很多相关的报道和文章，不过整个思路都还比较混乱，还是和大家分享分享吧，也希望一些专业同仁能给些意见。
! z) K, e3 g4 U3 q$ C5 {流式细胞技术分选法（FCM)，利用流式细胞仪对处在快速、直线、流动状态中的单细胞或生物颗粒进行多参数、快速定量分析，同时对特定群体加以分选的现代细胞分析技术。主要仪器是美国BD公司的BD FACS Aria流式细胞分选仪。
" e, W: T! F" Y免疫磁珠法（MACS)，核心是在磁珠表面包被具免疫反应性的抗体进行抗原抗体反应，在细胞表面形成玫瑰花结，这些结合了磁珠的细胞一旦置于强大的磁场下，就会与其他未被结合的细胞分群。1 j4 ~/ z6 \9 \9 Q+ b
密度梯度离心法，用一定的介质在离心管内形成连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。
; Y+ {" N- I9 M1 V( R负收集法，将不需要的细胞作为靶细胞用Lin抗体络合收集到一起，保留Lin阴性细胞，再用密度梯度离心法去除残留红细胞等，获得干细胞。
3 @! x3 c4 z. A- u
# e9 y) A) m# L: a1 B不过还有几点疑问：7 r) y& W" m; z; U/ d" e9 }
1，如果只要用到离心机的，都应该算是离心法，包括密度梯度离心法。Ficoll、peroll、甲基纤维素、明胶、淀粉等分离液法，是不是也应该属于离心法？羟乙基淀粉沉降法，如果用离心机离心（我看有的试验用离心有的没用），那是不是也是属于离心法？这么说来，负收集法也是一种离心法？
' R  S; j+ M& Q3 [/ i如果这样的话，分类应该变成FCM、MACS和离心法，离心法下分分离液法、沉降法、负收集法。% |1 L# I- g; x8 \7 [
2，国内开始引进自动化系统分离干细胞，AXP和Sepax，经常和人工的技术作比较，这两种自动化系统，都是离心法么，都用什么试剂么？
) S( y! `. t1 Y% m  c; `3，目前临床是用的较多的，有没有人知道都是用什么方法？
# {  [( F3 z% {8 O7 @0 @$ F8 K! e# y' H- z3 ?# t: f, s  x
肯定有很多说的不对的地方，大家见笑了，多多指导！

kenken

国内有很多医院的临床科室如消化，骨科，风湿科，内分泌，神经内外科，皮肤科，感染科，美容都在用，很多都用的是脐带血，所谓的负收集法。

yxc

干细胞实验及临床研究所包括的病种很广泛，包括用脐带干细胞，远远不只血液病。
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monday2019

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. A( D  k# }8 H6 M" p  }5 ]* g( J! D' ~. M6 P: q
其实关于负收集法和AXP系统的纯度的问题，我只是不太明白，负收集法第一步去除LIN阳性的细胞，第二步去除红细胞等，剩下所有种类的干细胞，而AXP系统或者是传统的手工分离系统，我感觉只能出去负收集法里面提到的红细胞，不太明白Lin阳性的有核细胞是在哪里除去。现在负收集法用的多么，我怎么感觉这个方法较传统手工方法更优似的~
% u. z9 ^! l; n1 [2 x5 f问题比较基础，专业人士给外行科普科普呵~

monday2019

回复 yxc 的帖子8 ]1 i1 h" d" `8 R) V. v

# V3 }3 _$ C/ J干细胞临床治疗，如果用脐带干细胞的话，大多是到脐带库里面去配型，多用于血液病吧？
/ \0 F! S# f) c7 D# B( X国内除了血液病，其它的临床资料就只能用骨髓和外周血了吧，其中外周血应该更多一些吧？这些医院或者临床治疗中心现在大部分都用人工的吧，未来我觉得也有引进MXP的可能吧，或者THERMOGENISIS再推出个PXP之类的，用来自动分离外周血。

yxc

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5 g# _1 Q) F+ l0 c; `7 ^: j: n$ t! G% G( b: Q2 ?' Q2 J
   国内医院开展的干细胞治疗不仅有骨髓和外周血，还有脐带干细胞。
* C# R. ~% w/ A: W  你说的是MXP就是MarrowXpress™吧？没听说过国内的应用情况，估计还是受到骨髓的本身影响。
' E! K% o+ ]! j8 Y, I9 u* ?4 |
, R/ ~$ ?  \8 k7 f2 Z这是其介绍
$ b/ O3 D: {# }1 f! l- l- F, hAdvanced bone marrow processing, stem cell harvesting, and data tracking.
5 g( x- d$ ?' ^The innovative MarrowXpress™ (MXP) System defines a new processing standard for isolating and retrieving stem cells from bone marrow aspirate. It’s an automated, fully closed, sterile system that volume-reduces bone marrow to a user-defined volume in 30 minutes, while retaining over 90% mononuclear cells (MNCs)**. Self-powered and microprocessor-controlled, the MarrowXpress platform contains flow control optical sensors which achieve precise separation.
, |) ]* \# m2 N
& c/ T7 _/ c4 m0 N, Y! M    Automated, closed system; N% L% V; E3 g, g
    Precise cell separation
3 D& r6 f9 f' o* k2 ]9 @& Q    Low residual red blood cell contamination
" z3 }; M4 N) J    Sterile in-line sampling
2 r2 Z4 ~+ R, p+ E    Rapid sample processing
: l! N$ b! d, N
0 c, w8 [1 ^# OHands-free operation — Automated, closed, sterile system.
* x% S' g9 }" m6 O6 _
+ K6 O( u/ l0 q& dHigh yields — Consistently high MNC recoveries and CD34+ recoveries.*
/ B: F, k3 o  C7 ~6 ]7 G( Y% u; U
  O0 H- n5 [& G6 E) H  k/ KReliable volume reduction — Reproducible reduction of initial unit volume to a user-determined final volume.
/ b  l% G( p: K2 H2 e5 J
/ q+ ^5 E0 A) ]- A3 Y% tStreamlines workflow — Simultaneous processing of up to six samples.
% O, q. z8 x# `/ f1 q2 Q+ l2 Q) |3 M
Safe operation —  In-line sterile sampling.$ @( v0 @9 m8 ?, ~* N
2 H. o) z+ V4 A9 \! `
Easy data management — Quick and accurate data tracking with XpressTRAK™ software.
3 s) E: {  \6 {6 E% l2 o
+ W6 _+ h& v2 x4 sRapid sample processing —  Sample separation and concentration complete in 30 minutes.
8 F& w( u% R6 U' a4 N+ W% j
$ v* k' I$ I' |( l( g; P% g. pSelf-powered —  Powered by a rechargeable NiMH battery.
" Z5 o9 H3 S! m2 M7 T/ E- e" `7 p( v- Y5 C. \. E
Real-time Communication — XpressLINK software provides the ability to link data from all AXP devices.
. j' W1 W: z, s. K2 zComplete system solution — The MarrowXpress™ System consists of the docking station, processing set, and XpressTRAK™ software that assists with cGMP and cGTP compliance.
) V" n' F! @0 y0 K! m

monday2019

回复 yxc 的帖子; w& W" h+ K  S# y

# [3 J0 U/ `' q2 y7 }感觉现在很多医院都建了干细胞临床治疗中心，效果和合法性先不说，数量倒是也不少了，特别是军队医院，这些临床的医院应该多是骨髓和外周血吧？
0 j: f& j" ~- v8 B9 ^5 S刚翻看thermogenisis的产品线，有个产品叫MXP的，貌似是骨髓用的，国内有用么?您听过么？

yxc

   关于负收集法和AXP自动系统两种方法所获取的干细胞的纯度，尚未见有人做出直接比较。
' s& w% k$ H7 Q4 Q8 i   AXP系统在国内主要应用于干细胞库建设，随着医院干细胞研究及临床应用的发展，将可能应用于外周血干细胞的采集，骨髓量小，一般不用吧。$ R8 P' l; [1 x9 O
   关于费用，希望是于成本呈正比的同时，尽量也与效果正相关。6 S! R& v8 u4 y, y: w0 P8 l
   望指正。

monday2019

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2 T* t/ A& o8 ]) J, j; h1 c/ F0 S- F, |
很专业！多谢！" A  {9 S, G, a- R: j
仔细看了下负收集法和AXP自动系统，负收集法去除了LIN阳性的细胞，即大部分不需要的成熟有核细胞，再和密度梯度离心法结合去除红细胞、血浆等，得到所有的干细胞；我看AXP系统介绍里面提到它分离出来的是一个BUFFY COAT，BUFFY COAT里面有白细胞、干细胞和部分RBC及血浆，那也就是说，是不是负收集法去除的非干细胞量较AXP更多，纯度更高呢？
6 H5 y  r- }% T; w我看国内用AXP系统的干细胞库越来越多了，不知道AXP系统能不能用来分离骨髓和外周血呢？如果可以的话，那未来临床上岂不是也有可能用的更多，医院可以把成本转嫁给病人的嘛~
" e6 t, w, F% p/ h

dinghuqing

这个讨论很好诶。可以跟大家学些东西哦。关注这些研究，期待干细胞研究的成果能尽快的 更多的用于临床！！！