临床干细胞分离方法讨论

monday2019

这些天在做干细胞分离方法的一些汇总研究，看了很多相关的报道和文章，不过整个思路都还比较混乱，还是和大家分享分享吧，也希望一些专业同仁能给些意见。3 w; }0 g7 {" W  J
流式细胞技术分选法（FCM)，利用流式细胞仪对处在快速、直线、流动状态中的单细胞或生物颗粒进行多参数、快速定量分析，同时对特定群体加以分选的现代细胞分析技术。主要仪器是美国BD公司的BD FACS Aria流式细胞分选仪。
* R2 k* T# R7 F$ w, z3 \$ @免疫磁珠法（MACS)，核心是在磁珠表面包被具免疫反应性的抗体进行抗原抗体反应，在细胞表面形成玫瑰花结，这些结合了磁珠的细胞一旦置于强大的磁场下，就会与其他未被结合的细胞分群。
5 f( B7 F  y8 X* \3 z密度梯度离心法，用一定的介质在离心管内形成连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。8 d# V4 ~' u9 T2 ?0 \' @' a
负收集法，将不需要的细胞作为靶细胞用Lin抗体络合收集到一起，保留Lin阴性细胞，再用密度梯度离心法去除残留红细胞等，获得干细胞。
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不过还有几点疑问：
6 ]5 m; y0 ~& k; ?; _3 r% I. {1，如果只要用到离心机的，都应该算是离心法，包括密度梯度离心法。Ficoll、peroll、甲基纤维素、明胶、淀粉等分离液法，是不是也应该属于离心法？羟乙基淀粉沉降法，如果用离心机离心（我看有的试验用离心有的没用），那是不是也是属于离心法？这么说来，负收集法也是一种离心法？
, v5 |5 M( |7 j4 |& n% l7 J1 P5 ]如果这样的话，分类应该变成FCM、MACS和离心法，离心法下分分离液法、沉降法、负收集法。3 R, w0 s/ S3 X+ Y: l  C, Q/ @
2，国内开始引进自动化系统分离干细胞，AXP和Sepax，经常和人工的技术作比较，这两种自动化系统，都是离心法么，都用什么试剂么？! S; V5 ^% z8 P  B
3，目前临床是用的较多的，有没有人知道都是用什么方法？; b* H% w( C$ f

2 S* W  A1 K  J肯定有很多说的不对的地方，大家见笑了，多多指导！

kenken

国内有很多医院的临床科室如消化，骨科，风湿科，内分泌，神经内外科，皮肤科，感染科，美容都在用，很多都用的是脐带血，所谓的负收集法。

yxc

干细胞实验及临床研究所包括的病种很广泛，包括用脐带干细胞，远远不只血液病。
9 \' r! x2 ^( H

monday2019

回复 yxc 的帖子0 H# f1 E; d. q1 }

$ F+ w2 g" U4 O9 B, t2 y其实关于负收集法和AXP系统的纯度的问题，我只是不太明白，负收集法第一步去除LIN阳性的细胞，第二步去除红细胞等，剩下所有种类的干细胞，而AXP系统或者是传统的手工分离系统，我感觉只能出去负收集法里面提到的红细胞，不太明白Lin阳性的有核细胞是在哪里除去。现在负收集法用的多么，我怎么感觉这个方法较传统手工方法更优似的~1 L  |! S; |$ b# O
问题比较基础，专业人士给外行科普科普呵~

monday2019

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( G% c" T5 Y/ D! F
, b* @4 z3 g. q5 _4 M( y" j+ W! Q干细胞临床治疗，如果用脐带干细胞的话，大多是到脐带库里面去配型，多用于血液病吧？
% B% m. s' f1 R% f4 g国内除了血液病，其它的临床资料就只能用骨髓和外周血了吧，其中外周血应该更多一些吧？这些医院或者临床治疗中心现在大部分都用人工的吧，未来我觉得也有引进MXP的可能吧，或者THERMOGENISIS再推出个PXP之类的，用来自动分离外周血。

yxc

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& g6 C$ j: {' Q& G7 ?3 z) Z" ?/ F: V( U- ^' j8 @6 T
   国内医院开展的干细胞治疗不仅有骨髓和外周血，还有脐带干细胞。# o+ {) p  j; i& _
  你说的是MXP就是MarrowXpress™吧？没听说过国内的应用情况，估计还是受到骨髓的本身影响。* d# W4 S6 S" {0 P) t! V# H

5 S6 ~% u% z8 {4 o这是其介绍( J& a- W: g, j( Z& V
Advanced bone marrow processing, stem cell harvesting, and data tracking.
9 ]" i; Q% v1 {* d7 }+ i$ ?The innovative MarrowXpress™ (MXP) System defines a new processing standard for isolating and retrieving stem cells from bone marrow aspirate. It’s an automated, fully closed, sterile system that volume-reduces bone marrow to a user-defined volume in 30 minutes, while retaining over 90% mononuclear cells (MNCs)**. Self-powered and microprocessor-controlled, the MarrowXpress platform contains flow control optical sensors which achieve precise separation.
0 B4 |( y7 ]+ L) I2 M7 I5 c/ v- }8 u6 T2 f# z. Q- w7 S8 {  L
    Automated, closed system
# ?# K2 F5 L' l3 s8 k    Precise cell separation6 M( m* z8 S# N" A7 d! i6 A
    Low residual red blood cell contamination" P7 h$ K; N' t
    Sterile in-line sampling* t% _# V  l" F$ e* Q8 m
    Rapid sample processing
& V4 W8 R6 ^5 L3 m+ c2 ]
' c' F" A. T. u5 C( C1 F( \8 I, iHands-free operation — Automated, closed, sterile system.3 @7 x4 f. n8 g6 d" m* l7 v* C

/ c0 B# N) w' J$ o" OHigh yields — Consistently high MNC recoveries and CD34+ recoveries.*" s' k5 G7 I9 q  o/ i

6 A6 u$ L* I% ~# J2 {Reliable volume reduction — Reproducible reduction of initial unit volume to a user-determined final volume.
: o" w9 y& ?, p9 O$ Z. V8 ^" k* A, U) e; `& Y
Streamlines workflow — Simultaneous processing of up to six samples.
6 ]& \# S  a9 v$ a4 d" M7 \
) w3 [0 c* _6 J/ |  Q( O3 `6 M7 GSafe operation —  In-line sterile sampling.
5 p8 h9 h& X1 v; P. W1 F2 ^5 O. o3 [/ h7 H4 u2 [6 _6 _0 c9 x
Easy data management — Quick and accurate data tracking with XpressTRAK™ software.
# d+ J6 J) H% q! z! L# i" }0 B8 Y
) j8 ?$ B, c3 [' WRapid sample processing —  Sample separation and concentration complete in 30 minutes.9 O# Y0 t6 n! R

2 Y* w" r' j: V& A- T1 t. SSelf-powered —  Powered by a rechargeable NiMH battery.
0 L5 ~- p" H7 s# c0 C9 y! y$ V9 [+ y+ s2 e7 }' K
Real-time Communication — XpressLINK software provides the ability to link data from all AXP devices.
' U- w, C7 O9 `Complete system solution — The MarrowXpress™ System consists of the docking station, processing set, and XpressTRAK™ software that assists with cGMP and cGTP compliance.; \. C' K9 b1 p" S$ B7 X, H. G3 h

monday2019

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5 n; I6 R5 N  B
, X* i9 Z. z. p感觉现在很多医院都建了干细胞临床治疗中心，效果和合法性先不说，数量倒是也不少了，特别是军队医院，这些临床的医院应该多是骨髓和外周血吧？
% i# \0 Z3 o  U1 w刚翻看thermogenisis的产品线，有个产品叫MXP的，貌似是骨髓用的，国内有用么?您听过么？

yxc

   关于负收集法和AXP自动系统两种方法所获取的干细胞的纯度，尚未见有人做出直接比较。
% Q: E3 z* _& n% Z& W/ h9 h9 t   AXP系统在国内主要应用于干细胞库建设，随着医院干细胞研究及临床应用的发展，将可能应用于外周血干细胞的采集，骨髓量小，一般不用吧。! d& Z- F+ e4 G' R  [
   关于费用，希望是于成本呈正比的同时，尽量也与效果正相关。
1 @/ m# |& |, v$ o2 }/ g3 B& f   望指正。

monday2019

回复 yxc 的帖子& m8 M) J; }) B2 F5 Y% }, G+ t: k

/ i2 b# e: a1 g. M0 X+ ]$ h很专业！多谢！9 V: W( w+ n3 l' M+ _
仔细看了下负收集法和AXP自动系统，负收集法去除了LIN阳性的细胞，即大部分不需要的成熟有核细胞，再和密度梯度离心法结合去除红细胞、血浆等，得到所有的干细胞；我看AXP系统介绍里面提到它分离出来的是一个BUFFY COAT，BUFFY COAT里面有白细胞、干细胞和部分RBC及血浆，那也就是说，是不是负收集法去除的非干细胞量较AXP更多，纯度更高呢？
* N8 K, u5 i# B3 f+ j6 V2 H我看国内用AXP系统的干细胞库越来越多了，不知道AXP系统能不能用来分离骨髓和外周血呢？如果可以的话，那未来临床上岂不是也有可能用的更多，医院可以把成本转嫁给病人的嘛~
( R" ?5 `& z- m0 x  t0 A% K5 _& y( ~

dinghuqing

这个讨论很好诶。可以跟大家学些东西哦。关注这些研究，期待干细胞研究的成果能尽快的 更多的用于临床！！！