临床干细胞分离方法讨论

monday2019

这些天在做干细胞分离方法的一些汇总研究，看了很多相关的报道和文章，不过整个思路都还比较混乱，还是和大家分享分享吧，也希望一些专业同仁能给些意见。
( \7 d% r2 @; r" U7 H流式细胞技术分选法（FCM)，利用流式细胞仪对处在快速、直线、流动状态中的单细胞或生物颗粒进行多参数、快速定量分析，同时对特定群体加以分选的现代细胞分析技术。主要仪器是美国BD公司的BD FACS Aria流式细胞分选仪。
; O4 |5 E: m7 a4 T免疫磁珠法（MACS)，核心是在磁珠表面包被具免疫反应性的抗体进行抗原抗体反应，在细胞表面形成玫瑰花结，这些结合了磁珠的细胞一旦置于强大的磁场下，就会与其他未被结合的细胞分群。, L0 i" ^7 i- F0 T$ B, O
密度梯度离心法，用一定的介质在离心管内形成连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。
2 r" g# J, K- Y  X  O. f/ [负收集法，将不需要的细胞作为靶细胞用Lin抗体络合收集到一起，保留Lin阴性细胞，再用密度梯度离心法去除残留红细胞等，获得干细胞。5 _5 P1 C, S* O  M; Q1 n# o

2 B! }; A$ P# b: G; [; O不过还有几点疑问：1 `% ^7 X$ g0 }$ H# B
1，如果只要用到离心机的，都应该算是离心法，包括密度梯度离心法。Ficoll、peroll、甲基纤维素、明胶、淀粉等分离液法，是不是也应该属于离心法？羟乙基淀粉沉降法，如果用离心机离心（我看有的试验用离心有的没用），那是不是也是属于离心法？这么说来，负收集法也是一种离心法？* T# `% ~# |: K5 J, p4 E" a+ g
如果这样的话，分类应该变成FCM、MACS和离心法，离心法下分分离液法、沉降法、负收集法。
+ H( I  a( x/ j) o3 y2，国内开始引进自动化系统分离干细胞，AXP和Sepax，经常和人工的技术作比较，这两种自动化系统，都是离心法么，都用什么试剂么？. x! C5 D) q8 R6 |: X
3，目前临床是用的较多的，有没有人知道都是用什么方法？, g! B8 C3 W4 t4 [4 h2 ^
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肯定有很多说的不对的地方，大家见笑了，多多指导！

kenken

国内有很多医院的临床科室如消化，骨科，风湿科，内分泌，神经内外科，皮肤科，感染科，美容都在用，很多都用的是脐带血，所谓的负收集法。

yxc

干细胞实验及临床研究所包括的病种很广泛，包括用脐带干细胞，远远不只血液病。
2 {& C4 K7 x$ @4 a7 \( ]

monday2019

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6 s6 f& s) ~& p8 {& Y: x; ?7 D% H4 l% g# ?" N; d7 C7 N
其实关于负收集法和AXP系统的纯度的问题，我只是不太明白，负收集法第一步去除LIN阳性的细胞，第二步去除红细胞等，剩下所有种类的干细胞，而AXP系统或者是传统的手工分离系统，我感觉只能出去负收集法里面提到的红细胞，不太明白Lin阳性的有核细胞是在哪里除去。现在负收集法用的多么，我怎么感觉这个方法较传统手工方法更优似的~
  M& S* A0 t& I; U7 e问题比较基础，专业人士给外行科普科普呵~

monday2019

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' F! c: U/ D* f2 \  F, W" g% D: e$ d
# Y+ B* v1 |. M5 n# j干细胞临床治疗，如果用脐带干细胞的话，大多是到脐带库里面去配型，多用于血液病吧？( ^/ f+ G# M3 V# [; X
国内除了血液病，其它的临床资料就只能用骨髓和外周血了吧，其中外周血应该更多一些吧？这些医院或者临床治疗中心现在大部分都用人工的吧，未来我觉得也有引进MXP的可能吧，或者THERMOGENISIS再推出个PXP之类的，用来自动分离外周血。

yxc

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7 p1 m  C# u  v/ D& \" D
2 f4 ~* A# M6 }$ J* A& o# {9 i   国内医院开展的干细胞治疗不仅有骨髓和外周血，还有脐带干细胞。' U# s7 X" O3 E' B6 o$ V3 v* j
  你说的是MXP就是MarrowXpress™吧？没听说过国内的应用情况，估计还是受到骨髓的本身影响。! x4 B" J( U9 s' ?$ b9 a

% z' l! s+ K* E8 i% g这是其介绍' o4 m0 s% B4 G/ i+ y
Advanced bone marrow processing, stem cell harvesting, and data tracking.( Z9 e1 B! X$ @/ c4 Z" M5 a! g, O
The innovative MarrowXpress™ (MXP) System defines a new processing standard for isolating and retrieving stem cells from bone marrow aspirate. It’s an automated, fully closed, sterile system that volume-reduces bone marrow to a user-defined volume in 30 minutes, while retaining over 90% mononuclear cells (MNCs)**. Self-powered and microprocessor-controlled, the MarrowXpress platform contains flow control optical sensors which achieve precise separation.% ]6 Y' U! ]5 s% s" J( l
) ?# }8 B. S9 A! W7 B' P
    Automated, closed system" I0 ?% @0 n" W" m+ ?
    Precise cell separation  Z$ L( V5 [0 x8 `
    Low residual red blood cell contamination( v) S! n1 E) m9 `$ J
    Sterile in-line sampling
$ D% m8 W. t, k3 \+ j8 W: u    Rapid sample processing
/ n4 p1 [; D7 _: J5 `4 W" Z, q8 m% S: p* |; v
Hands-free operation — Automated, closed, sterile system.
" k- t) r/ R6 o( ]; x2 r1 r+ V: o5 T+ I9 g
High yields — Consistently high MNC recoveries and CD34+ recoveries.*
( K8 `. O% p$ B% |/ S
, e' z3 u$ z9 HReliable volume reduction — Reproducible reduction of initial unit volume to a user-determined final volume.4 Z+ T, D! E6 M4 @  Q: i- f
" |$ L4 V1 V6 q+ O1 O3 d
Streamlines workflow — Simultaneous processing of up to six samples.+ s7 N3 ~+ a! ^) y9 ]* m
2 k9 L; g, o* [# D, w* n8 @
Safe operation —  In-line sterile sampling., Q9 K/ \8 m1 w+ o

. Y# O' N) ~# R% b0 Z0 p3 J3 Y6 gEasy data management — Quick and accurate data tracking with XpressTRAK™ software.
/ F- _2 |$ ^& A6 F" C& u# v, j$ b6 Q6 [5 }' Z0 K) h
Rapid sample processing —  Sample separation and concentration complete in 30 minutes.1 _6 m. p& m9 V# X; j

9 f! F6 O; h. C/ P$ i  m4 E$ j- rSelf-powered —  Powered by a rechargeable NiMH battery.$ W* N8 Z, c& \% Q7 E
; s4 V6 O, l5 R) e# Q) H4 b
Real-time Communication — XpressLINK software provides the ability to link data from all AXP devices.6 w# _6 _( c' T' g3 g% _
Complete system solution — The MarrowXpress™ System consists of the docking station, processing set, and XpressTRAK™ software that assists with cGMP and cGTP compliance.
. L1 g) U) h0 i: {% }

monday2019

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0 y# m9 O) J/ e. l9 @( q
$ x& B. X( L0 j* V5 I8 d7 P5 ^感觉现在很多医院都建了干细胞临床治疗中心，效果和合法性先不说，数量倒是也不少了，特别是军队医院，这些临床的医院应该多是骨髓和外周血吧？! b) ~( ?( M9 M5 v
刚翻看thermogenisis的产品线，有个产品叫MXP的，貌似是骨髓用的，国内有用么?您听过么？

yxc

   关于负收集法和AXP自动系统两种方法所获取的干细胞的纯度，尚未见有人做出直接比较。6 Y3 v% O5 M! T9 e2 Q
   AXP系统在国内主要应用于干细胞库建设，随着医院干细胞研究及临床应用的发展，将可能应用于外周血干细胞的采集，骨髓量小，一般不用吧。
5 l5 f; v1 g0 @   关于费用，希望是于成本呈正比的同时，尽量也与效果正相关。! d* m( i( d. \5 V$ x( _
   望指正。

monday2019

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- j+ C7 T0 y' Q" H
8 G# I' N! c( W. \8 b. Q8 E很专业！多谢！3 ?2 [, r8 j, X% b3 C* C! P2 b
仔细看了下负收集法和AXP自动系统，负收集法去除了LIN阳性的细胞，即大部分不需要的成熟有核细胞，再和密度梯度离心法结合去除红细胞、血浆等，得到所有的干细胞；我看AXP系统介绍里面提到它分离出来的是一个BUFFY COAT，BUFFY COAT里面有白细胞、干细胞和部分RBC及血浆，那也就是说，是不是负收集法去除的非干细胞量较AXP更多，纯度更高呢？
# `7 A$ {/ U5 G6 j# z1 |我看国内用AXP系统的干细胞库越来越多了，不知道AXP系统能不能用来分离骨髓和外周血呢？如果可以的话，那未来临床上岂不是也有可能用的更多，医院可以把成本转嫁给病人的嘛~
$ x1 B  H3 z$ z

dinghuqing

这个讨论很好诶。可以跟大家学些东西哦。关注这些研究，期待干细胞研究的成果能尽快的 更多的用于临床！！！