临床干细胞分离方法讨论

monday2019

这些天在做干细胞分离方法的一些汇总研究，看了很多相关的报道和文章，不过整个思路都还比较混乱，还是和大家分享分享吧，也希望一些专业同仁能给些意见。1 f- K2 P$ N& M/ @& A) s" k
流式细胞技术分选法（FCM)，利用流式细胞仪对处在快速、直线、流动状态中的单细胞或生物颗粒进行多参数、快速定量分析，同时对特定群体加以分选的现代细胞分析技术。主要仪器是美国BD公司的BD FACS Aria流式细胞分选仪。+ _5 @. r" n' _: d+ K
免疫磁珠法（MACS)，核心是在磁珠表面包被具免疫反应性的抗体进行抗原抗体反应，在细胞表面形成玫瑰花结，这些结合了磁珠的细胞一旦置于强大的磁场下，就会与其他未被结合的细胞分群。
1 x* }  H: b# c密度梯度离心法，用一定的介质在离心管内形成连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。
* ~, J* U+ r, R0 ^9 l负收集法，将不需要的细胞作为靶细胞用Lin抗体络合收集到一起，保留Lin阴性细胞，再用密度梯度离心法去除残留红细胞等，获得干细胞。
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不过还有几点疑问：
  r0 _/ {; V8 K2 |" o  f. }1，如果只要用到离心机的，都应该算是离心法，包括密度梯度离心法。Ficoll、peroll、甲基纤维素、明胶、淀粉等分离液法，是不是也应该属于离心法？羟乙基淀粉沉降法，如果用离心机离心（我看有的试验用离心有的没用），那是不是也是属于离心法？这么说来，负收集法也是一种离心法？
0 M( D" r3 d$ M% ~2 c; X' R: C如果这样的话，分类应该变成FCM、MACS和离心法，离心法下分分离液法、沉降法、负收集法。# Y) n- Z/ _9 D6 `( }* x
2，国内开始引进自动化系统分离干细胞，AXP和Sepax，经常和人工的技术作比较，这两种自动化系统，都是离心法么，都用什么试剂么？* f, ^7 @" ~' n, E, o
3，目前临床是用的较多的，有没有人知道都是用什么方法？0 ~! ?  j0 O- M# w4 d& O. A% {
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肯定有很多说的不对的地方，大家见笑了，多多指导！

kenken

国内有很多医院的临床科室如消化，骨科，风湿科，内分泌，神经内外科，皮肤科，感染科，美容都在用，很多都用的是脐带血，所谓的负收集法。

yxc

干细胞实验及临床研究所包括的病种很广泛，包括用脐带干细胞，远远不只血液病。
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monday2019

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" n( F$ ]$ T. e) b7 n' B- s
8 u/ U* ]  q) t+ }. H6 L5 J其实关于负收集法和AXP系统的纯度的问题，我只是不太明白，负收集法第一步去除LIN阳性的细胞，第二步去除红细胞等，剩下所有种类的干细胞，而AXP系统或者是传统的手工分离系统，我感觉只能出去负收集法里面提到的红细胞，不太明白Lin阳性的有核细胞是在哪里除去。现在负收集法用的多么，我怎么感觉这个方法较传统手工方法更优似的~( w1 Y+ \  t- S1 Q
问题比较基础，专业人士给外行科普科普呵~

monday2019

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/ p# O3 h' k, Q3 l: T. m2 E
9 U1 t" Y1 v1 N* B. a- x干细胞临床治疗，如果用脐带干细胞的话，大多是到脐带库里面去配型，多用于血液病吧？$ e6 {: d1 A  b- L( N+ N7 A
国内除了血液病，其它的临床资料就只能用骨髓和外周血了吧，其中外周血应该更多一些吧？这些医院或者临床治疗中心现在大部分都用人工的吧，未来我觉得也有引进MXP的可能吧，或者THERMOGENISIS再推出个PXP之类的，用来自动分离外周血。

yxc

回复 monday2019 的帖子- W2 K5 l6 z+ z  _1 {
& U! t, E, A0 M
   国内医院开展的干细胞治疗不仅有骨髓和外周血，还有脐带干细胞。
. @& i/ h! t/ _; S5 n/ U  你说的是MXP就是MarrowXpress™吧？没听说过国内的应用情况，估计还是受到骨髓的本身影响。
4 J3 t- B! G5 p& q* R! d, |- D/ f8 a8 ^' T
这是其介绍$ h9 Z+ k2 v! k& v1 w) _
Advanced bone marrow processing, stem cell harvesting, and data tracking.
' n4 J7 M5 B  W2 JThe innovative MarrowXpress™ (MXP) System defines a new processing standard for isolating and retrieving stem cells from bone marrow aspirate. It’s an automated, fully closed, sterile system that volume-reduces bone marrow to a user-defined volume in 30 minutes, while retaining over 90% mononuclear cells (MNCs)**. Self-powered and microprocessor-controlled, the MarrowXpress platform contains flow control optical sensors which achieve precise separation.
- j1 [$ K: ]" c9 @' _( }# x* f4 {
    Automated, closed system
7 z9 Y" ~+ O3 A- E  c    Precise cell separation5 _, t- a, L! C5 [4 G( L
    Low residual red blood cell contamination
1 f! S  j- H' j3 u# {) ~    Sterile in-line sampling/ G) d5 h3 b; c; X. ~! r" ^% j# ?
    Rapid sample processing
7 [/ c7 G9 y# Z' w5 c+ x. [2 g# ?/ r  T% u$ M
Hands-free operation — Automated, closed, sterile system.
2 U+ _0 Y$ m5 P( o; f5 N/ ^$ f/ g
0 N4 D. c4 A, Q  H: n" W4 t; }High yields — Consistently high MNC recoveries and CD34+ recoveries.*0 P# j! a2 Y; X/ ?
+ y: {& e# a+ v. V% v0 P
Reliable volume reduction — Reproducible reduction of initial unit volume to a user-determined final volume.* T% N& y5 t& N- O  ~# e! @5 n
& K8 Z- W' u5 d( v( B* V, y4 N. j
Streamlines workflow — Simultaneous processing of up to six samples.
: c% u$ `6 C$ m9 }8 E# z% m! @8 D- K  J5 i' \
Safe operation —  In-line sterile sampling.
5 f; V3 c' _) F
0 S# j% _1 t: O9 U3 S8 [Easy data management — Quick and accurate data tracking with XpressTRAK™ software.4 y1 g4 r. |' n9 Q. {

# @. `  P3 H+ F1 V( @Rapid sample processing —  Sample separation and concentration complete in 30 minutes.
7 {, q1 e5 n$ q+ u2 @9 g4 U! Q
( |1 M1 }7 N$ ASelf-powered —  Powered by a rechargeable NiMH battery.# y2 O8 X& c+ P3 w9 t. U' e
# j% \/ u& k7 A9 A. O7 Q
Real-time Communication — XpressLINK software provides the ability to link data from all AXP devices.7 k/ l, m  ]7 a  E- q7 s; x
Complete system solution — The MarrowXpress™ System consists of the docking station, processing set, and XpressTRAK™ software that assists with cGMP and cGTP compliance.2 z( S% D0 \& ~; i5 w3 a- D5 _

monday2019

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& i: G0 [8 a+ _% q& y0 q/ @8 U2 q# l! P) P. c! D
感觉现在很多医院都建了干细胞临床治疗中心，效果和合法性先不说，数量倒是也不少了，特别是军队医院，这些临床的医院应该多是骨髓和外周血吧？
8 s) K+ ?! {$ w& l! S7 C刚翻看thermogenisis的产品线，有个产品叫MXP的，貌似是骨髓用的，国内有用么?您听过么？

yxc

   关于负收集法和AXP自动系统两种方法所获取的干细胞的纯度，尚未见有人做出直接比较。( M. k3 i! ^  E6 [% y
   AXP系统在国内主要应用于干细胞库建设，随着医院干细胞研究及临床应用的发展，将可能应用于外周血干细胞的采集，骨髓量小，一般不用吧。1 z/ H+ }) q8 ^, w8 F7 ?4 O
   关于费用，希望是于成本呈正比的同时，尽量也与效果正相关。
7 p0 g  v% g! F   望指正。

monday2019

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% U3 g* _9 ]1 V% a; u" b+ Z3 u7 T4 m; K' ~; e
很专业！多谢！# q- f! v$ p# e# u" A
仔细看了下负收集法和AXP自动系统，负收集法去除了LIN阳性的细胞，即大部分不需要的成熟有核细胞，再和密度梯度离心法结合去除红细胞、血浆等，得到所有的干细胞；我看AXP系统介绍里面提到它分离出来的是一个BUFFY COAT，BUFFY COAT里面有白细胞、干细胞和部分RBC及血浆，那也就是说，是不是负收集法去除的非干细胞量较AXP更多，纯度更高呢？
$ v$ x6 a9 ~9 I$ ]+ }我看国内用AXP系统的干细胞库越来越多了，不知道AXP系统能不能用来分离骨髓和外周血呢？如果可以的话，那未来临床上岂不是也有可能用的更多，医院可以把成本转嫁给病人的嘛~1 M' n  f# @6 N7 ^

dinghuqing

这个讨论很好诶。可以跟大家学些东西哦。关注这些研究，期待干细胞研究的成果能尽快的 更多的用于临床！！！