临床干细胞分离方法讨论

monday2019

这些天在做干细胞分离方法的一些汇总研究，看了很多相关的报道和文章，不过整个思路都还比较混乱，还是和大家分享分享吧，也希望一些专业同仁能给些意见。
$ T4 [) m8 p5 r5 C5 t% F$ |& j流式细胞技术分选法（FCM)，利用流式细胞仪对处在快速、直线、流动状态中的单细胞或生物颗粒进行多参数、快速定量分析，同时对特定群体加以分选的现代细胞分析技术。主要仪器是美国BD公司的BD FACS Aria流式细胞分选仪。
  k8 y$ H+ g; x免疫磁珠法（MACS)，核心是在磁珠表面包被具免疫反应性的抗体进行抗原抗体反应，在细胞表面形成玫瑰花结，这些结合了磁珠的细胞一旦置于强大的磁场下，就会与其他未被结合的细胞分群。
8 T" x7 k  |4 u- w; v/ _! h密度梯度离心法，用一定的介质在离心管内形成连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。
* K/ r" z  ]8 m$ L0 G# ~( F负收集法，将不需要的细胞作为靶细胞用Lin抗体络合收集到一起，保留Lin阴性细胞，再用密度梯度离心法去除残留红细胞等，获得干细胞。
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不过还有几点疑问：
5 k& B  U' |; h+ ^* ^1，如果只要用到离心机的，都应该算是离心法，包括密度梯度离心法。Ficoll、peroll、甲基纤维素、明胶、淀粉等分离液法，是不是也应该属于离心法？羟乙基淀粉沉降法，如果用离心机离心（我看有的试验用离心有的没用），那是不是也是属于离心法？这么说来，负收集法也是一种离心法？
% ~! I! B1 p2 c5 {. P! K# `如果这样的话，分类应该变成FCM、MACS和离心法，离心法下分分离液法、沉降法、负收集法。8 f" K/ F0 @" I* {6 M5 ?# d
2，国内开始引进自动化系统分离干细胞，AXP和Sepax，经常和人工的技术作比较，这两种自动化系统，都是离心法么，都用什么试剂么？
( J2 Y$ v. U( n/ C, Q3，目前临床是用的较多的，有没有人知道都是用什么方法？
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8 c1 Q3 B! ]- n  s% A0 G: W肯定有很多说的不对的地方，大家见笑了，多多指导！

yxc

1.主要依靠离心机的方法，才应该算是离心法7 d0 ?. B* `- c, m9 m$ d  I
主要包括密度梯度离心法，包括Ficoll、peroll等分离液。
; @0 T. y8 `4 `) ^- R- r0 w沉降法、负收集法是区别于密度梯度离心的特殊离心法，有各自的原理支持。
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4 e; X* r$ `# o2.AXP Auto Xpress™ Platform系统是用来收集脐带血中的富含干细胞的部分，主要是为降低细胞采集期间受污染的几率提供一个密封及无菌的环境，与传统人工采集的原理并无本质区别，官网http://www.gelifesciences.com/ap ... t/LD_338528314-J450
# ?: b( B: J' ?6 C3 ?" d1 b有pdf全文2 K( _8 ~) V" }& n6 S8 e) E( G2 v
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3.对于多数刚开展干细胞研究的单位来说，密度梯度离心法是比较适合的，设备、试剂的获取、价位、可操作性比较理想，但对于计划今后大规模应用的单位，肯定有大厂家瞄准商机制造出更好的设备，期待权威分析。! j! Q# k$ d5 C9 q( Q; y

yxc

ThermoGenesis AXP AutoXpress Platform

wangyashuai

我以前看过可以用多次传代的方法纯化干细胞，这是不是因为干细胞可以传代生长，而普通细胞不能传太多代，就死光了。

ljcc

是否也多次放疗后残留的不敏感细胞也可代表干细胞，另外无血清培养基培养出来的细胞球也算干细胞。

dwl1209

只要是涉及到离心的，你都可以认为是离心法，只是根据实验室的各种情况所选试剂不同，用途不同而已。离心法成本最低，而其他的FCM和MACS等成本相对较高，但其纯度较高，也就是各有优缺点，这个要看实验室的具体情况了。至于你说的分法，我倒觉得为什么非要分个类呢？很多时候很多干细胞的分离貌似都是不只用一种方法，而是结合起来使用的，比如Ficoll分离和FCM的结合使用。临床级别的干细胞，能减少中间环节的尽量减少，但这往往跟干细胞类型分离效率又有关系，说这个可就有点复杂了。理想状态下的分离肯定是既要不受外界影响还要保证临床效果，这个探索可就遥远了。个人意见，仅供讨论。

monday2019

其实并不是非要分个类，只是希望能够从分类的角度对干细胞的分离方法做个汇总，供大家参考讨论，也可以看看目前临床上多采用什么样的方法。多多交流！

晏子

首先用HES沉淀，然后Ficoll密度梯度离心，若混有大量的红细胞再加细胞裂解液！

松鼠

看过一篇文献《自体骨髓间充质干细胞移植治疗肝衰竭》中，骨髓间充质干细胞的采集和分离方法如下：
+ V; u- {. T: o3 S* V5 y8 g( L移植组患者在接受1周的药物治疗后，在严格无菌的条件下，以髂前上棘为穿刺点，抽取骨髓100-120ml；在无菌的细胞培养室中利用密度梯度离心法进行分离，用生理盐水稀释骨髓后，缓慢加入等量的percol分离培养基，在离心机中以2500转/分的转速离心30分钟。分离得到单个核细胞，并用10ml生理盐水冲洗3次。收集细胞悬液并保存在10ml生理盐水中，其中0.2ml接种在含有10%胎牛血清的L-DMEM培养基中。

dinghuqing

这个讨论很好诶。可以跟大家学些东西哦。关注这些研究，期待干细胞研究的成果能尽快的 更多的用于临床！！！