临床干细胞分离方法讨论

monday2019

这些天在做干细胞分离方法的一些汇总研究，看了很多相关的报道和文章，不过整个思路都还比较混乱，还是和大家分享分享吧，也希望一些专业同仁能给些意见。
9 W6 o8 M+ D2 \  [3 D/ J流式细胞技术分选法（FCM)，利用流式细胞仪对处在快速、直线、流动状态中的单细胞或生物颗粒进行多参数、快速定量分析，同时对特定群体加以分选的现代细胞分析技术。主要仪器是美国BD公司的BD FACS Aria流式细胞分选仪。2 F/ `1 D# Z. Q" b
免疫磁珠法（MACS)，核心是在磁珠表面包被具免疫反应性的抗体进行抗原抗体反应，在细胞表面形成玫瑰花结，这些结合了磁珠的细胞一旦置于强大的磁场下，就会与其他未被结合的细胞分群。; ^/ T% C4 o! Q3 S2 Y5 q, ]
密度梯度离心法，用一定的介质在离心管内形成连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。: N3 ^0 _* ?: Z( r$ D" M8 a
负收集法，将不需要的细胞作为靶细胞用Lin抗体络合收集到一起，保留Lin阴性细胞，再用密度梯度离心法去除残留红细胞等，获得干细胞。, Z; T5 X' B& D3 a" Q! ~( y" m5 b

8 J) {) |- ?! V  f7 f不过还有几点疑问：
, \2 T* S- Y! e& G. a' t& @  V1，如果只要用到离心机的，都应该算是离心法，包括密度梯度离心法。Ficoll、peroll、甲基纤维素、明胶、淀粉等分离液法，是不是也应该属于离心法？羟乙基淀粉沉降法，如果用离心机离心（我看有的试验用离心有的没用），那是不是也是属于离心法？这么说来，负收集法也是一种离心法？- J7 r/ {  u: s0 ?; B
如果这样的话，分类应该变成FCM、MACS和离心法，离心法下分分离液法、沉降法、负收集法。
$ U& p. U; p' ?& |2，国内开始引进自动化系统分离干细胞，AXP和Sepax，经常和人工的技术作比较，这两种自动化系统，都是离心法么，都用什么试剂么？
8 L, Z0 G: B$ A0 y. e( k' H( g! v3，目前临床是用的较多的，有没有人知道都是用什么方法？; \: |( _2 l. S" C9 v6 b  b

) G/ {( }) K' X  ]0 s2 _9 z3 V肯定有很多说的不对的地方，大家见笑了，多多指导！

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其实并不是非要分个类，只是希望能够从分类的角度对干细胞的分离方法做个汇总，供大家参考讨论，也可以看看目前临床上多采用什么样的方法。多多交流！

monday2019

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8 G, Z* _; Q( n7 i9 P. X; A% |% z5 D- I  [2 o: S- p% l+ y
很专业！多谢！& v! z% j) q9 m" U) `
仔细看了下负收集法和AXP自动系统，负收集法去除了LIN阳性的细胞，即大部分不需要的成熟有核细胞，再和密度梯度离心法结合去除红细胞、血浆等，得到所有的干细胞；我看AXP系统介绍里面提到它分离出来的是一个BUFFY COAT，BUFFY COAT里面有白细胞、干细胞和部分RBC及血浆，那也就是说，是不是负收集法去除的非干细胞量较AXP更多，纯度更高呢？) b$ o: K. o4 t- w0 f+ d6 G/ S1 |
我看国内用AXP系统的干细胞库越来越多了，不知道AXP系统能不能用来分离骨髓和外周血呢？如果可以的话，那未来临床上岂不是也有可能用的更多，医院可以把成本转嫁给病人的嘛~$ c" e6 F) Y: U- `- k

monday2019

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9 d* m) Z8 j' ]% E  B7 i+ g6 A! Q0 q+ F* k  e2 Z* F9 S; a6 F: k
感觉现在很多医院都建了干细胞临床治疗中心，效果和合法性先不说，数量倒是也不少了，特别是军队医院，这些临床的医院应该多是骨髓和外周血吧？
. t) E) e2 Z! _+ [( S刚翻看thermogenisis的产品线，有个产品叫MXP的，貌似是骨髓用的，国内有用么?您听过么？

monday2019

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- P( S0 d  x  a1 N8 n, F- M9 F( g3 ^; L% Y6 H
干细胞临床治疗，如果用脐带干细胞的话，大多是到脐带库里面去配型，多用于血液病吧？
$ `% d1 W( i/ D5 f$ X9 Y国内除了血液病，其它的临床资料就只能用骨髓和外周血了吧，其中外周血应该更多一些吧？这些医院或者临床治疗中心现在大部分都用人工的吧，未来我觉得也有引进MXP的可能吧，或者THERMOGENISIS再推出个PXP之类的，用来自动分离外周血。

monday2019

回复 yxc 的帖子0 V2 `2 s' {$ ~% x6 e
$ V1 j9 s- G5 s) q8 B; p
其实关于负收集法和AXP系统的纯度的问题，我只是不太明白，负收集法第一步去除LIN阳性的细胞，第二步去除红细胞等，剩下所有种类的干细胞，而AXP系统或者是传统的手工分离系统，我感觉只能出去负收集法里面提到的红细胞，不太明白Lin阳性的有核细胞是在哪里除去。现在负收集法用的多么，我怎么感觉这个方法较传统手工方法更优似的~! C- o+ L7 L  j9 F1 S# p3 ?
问题比较基础，专业人士给外行科普科普呵~