乳腺癌干细胞球传代

dmmwhb

六孔板养乳腺癌干细胞球，低于1000个/ml细胞浓度，加3ml培养液，请问多长时间换液？传代是吹打成单细胞后一个板传两个板或一瓶传两瓶吗？谢谢各位大侠了

一枝独秀

需用胰酶消化成单个细胞后，再按一定密度接种

dmmwhb

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( R- I% U) J8 b1 t4 Z/ o) M. Q
谢谢，是离心收集细胞球后加胰酶消化10分钟左右后再加培养液离心收集细胞，然后再加培养液吹打成单细胞悬液接种吗

一枝独秀

是的，不过使用的不是普通的胰酶，而是2 ML TrypLETM express (Invitrogen cat. no. 12604-021)，37度水浴消化20分钟

yxzxlmlf

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& A, Z7 l" K1 }& b3 @6 a6 S, A用0.05%胰酶消化就行

yehaizi

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" p9 x/ _8 i# |$ N; D那如果用的是胰酶消化，在后续表面标记筛选的时候会不会对细胞的表面标记有影响？

细胞海洋

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fengjh100

低于1000个/ml细胞浓度，加3ml培养液，请问多长时间换液？传代是吹打成单细胞后一个板传两个板或一瓶传两瓶吗？
, f( I7 c" g/ W0 F4 W3 A我根据自己的经验提示下吧，3ml培养液，一般细胞不是很多的话4-5天更换一次液体是可以的，因为是悬浮细胞，可以3-4天加液。传代不需要吹散，因为干细胞球很难吹打或消化成单个细胞的，除非强力消化，那样细胞状态就不好了。我的经验是直接吸取一半的细胞到另瓶中，继续饲养。等养足够数量了再消化。不知回答可否满意。

lily132

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( j( T/ {' M  @1 M4 Q你好fengjh100,
3 |8 Y2 R$ d+ y+ e/ q; E你说“我的经验是直接吸取一半的细胞到另瓶中，继续饲养。等养足够数量了再消化”。 请问你养多少天才能养够数量，细胞球长到多大？