求方法：小鼠或人的精子和卵母细胞的染色体核型分析

hcluo

求方法：小鼠或人的精子和卵母细胞的染色体核型分析，最好能提供一下详细的步骤或者参考文献。
' Z/ Y# N( W9 y0 W; A' D. Q5 G, h  c0 W) c
感谢啊！
' s0 n5 W# b2 Q$ S+ G% _- s8 _! w4 L2 t- ~) q" }& H
哪位能指导一下，不胜感激啊！

liluli0715

本人目前也在做MSC的核型分析，大家一起交流。具体步骤：实验过程：
+ P2 d4 `1 q5 S* ^6 l) l- n当细胞处于对数期时接秋水仙素到培养瓶中终浓度0.2ug/ml，孵育4h；: X5 P  |9 n1 z# Z. b: r
收集细胞：0.25%胰酶消化，137g，1500rpm离心5min；8 z% x. B7 a+ F+ T6 F8 S& o
低渗透：细胞沉淀用0.075MKCl重悬，再补足至5ml，用枪头轻轻吹打，37度水浴孵育20min；) [8 ~4 n! f+ C/ r" c7 p
预固定：加200ul新配固定液（甲醇：冰醋酸 3:17 X" G' }0 ]  F7 x
）, j$ s* e' C$ y) h7 B& W
137g，1500rpm离心5min；
/ Y- ?  ]* Y" O# P; r/ N固定：细胞沉淀用新配的固定液重悬，过夜固定；
5 S3 A  u9 h& z- K+ |7 L重复固定：137g，1500rpm离心5min，重复固定两次；+ D. r2 \9 Z0 q: V
90度水温，蒸汽熏蒸30s；
2 h" b( T# i8 E3 j* u火焰上固定5s，吉姆萨染液染色；: ~) y# L& G: k6 i  }
镜检。. }( Q( X7 J; L( I8 a; I

" @2 \; ^- e2 v! D4 n- N" O9 E, d3 \此外，做核型所用的载玻片最好是冰片，其它具体细节还要靠自己摸索的，比如滴片的高度等

jhu132llh

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# p% L0 j$ l' e  W) ]
# m/ Y5 Z/ B/ E) k9 I0 @感谢分享